Ⅰ型鴨病毒性肝炎SG株的致病性研究及全基因組序列測(cè)定與分析.pdf

1、鴨I型病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH-I)是由I型鴨肝炎病毒引起的雛鴨高度致死性、傳播性的病毒性疾病，主要侵害6周齡以內(nèi)雛鴨，以2日齡至3周齡的雛鴨最為易感，成年鴨有抵抗力。DHV有I型、II型和Ⅲ型，其中I型和Ⅲ型屬于小RNA病毒科，II型屬于星狀病毒科。我國(guó)主要流行的是I型鴨肝炎病毒，該病是養(yǎng)鴨業(yè)的主要疾病之一，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 本研究主要包括以下內(nèi)容： 1、對(duì)山東壽光地區(qū)

2、的疑似鴨病毒性肝炎的病鴨肝組織進(jìn)行病原分離，通過(guò)鴨胚尿囊腔接種分毒、血凝實(shí)驗(yàn)、標(biāo)準(zhǔn)血清中和實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)以及RT-PCR檢測(cè)對(duì)病毒進(jìn)行鑒定，并在此基礎(chǔ)上對(duì)該病毒的ELD50和LD50進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明所分離病毒無(wú)血凝性，人工感染12日齡鴨胚和7日齡雛鴨后表現(xiàn)出典型的鴨肝炎病毒致病特征，能被DHV-I標(biāo)準(zhǔn)抗血清中和，RT-PCR檢測(cè)及序列測(cè)定為傳統(tǒng)的DHV-I，其第5代病毒尿囊液對(duì)12日齡鴨胚的ELD50為10-5.58/0.2ml

3、，對(duì)7日齡雛鴨的LD50為10-4.68/0.2ml。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本研究在山東壽光地區(qū)成功分離到一株傳統(tǒng)I型鴨肝炎病毒強(qiáng)毒，命名為SG株DHV-I。 2、根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的DVH-I的全基因組序列，本研究設(shè)計(jì)了9對(duì)特異性引物對(duì)SG株DVH-I全基因組進(jìn)行擴(kuò)增及克隆測(cè)序，序列拼接后，進(jìn)行BLAST在線同源比較，確定為I型鴨肝炎病毒序列，并提交GenBank，登錄號(hào)為FJ971623。測(cè)序結(jié)果顯示SG株DVH-I基因組全長(zhǎng)7690bp(

4、3'端ploy(A)尾巴除外)，基因組結(jié)構(gòu)為5'UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3'UTR，包含一個(gè)全長(zhǎng)6750bp大的ORF，編碼2249個(gè)氨基酸長(zhǎng)的多聚蛋白(Polyprotein)，具有與小RNA病毒科其他成員相似的切割位點(diǎn)，且被切割成11個(gè)終蛋白產(chǎn)物。將所獲得的SG株DHV-I的全基因組核苷酸序列、Polyprotein氨基酸序列、VP1氨基酸序列、P1核苷酸序列以及3D氨基酸