鴨星狀病毒1型WF1202株全基因組序列的測(cè)定與單因子血清的制備.pdf

1、鴨病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH)是雛鴨的一種傳播迅速、高度致死的病毒性傳染病，由鴨甲肝病毒(Duck hepatitis Avirus，DHAV)和鴨星狀病毒(Duck astrovirus，DAstV)引起，主要感染3周齡以內(nèi)的雛鴨。根據(jù)2009年的國(guó)際病毒分類委員第十次分類報(bào)告，將DHV分為鴨甲肝病毒(DHAV)，鴨星狀病毒1型(DAstV-1)，鴨星狀病毒2型(DAstV-2)三個(gè)血清型。DHAV-

2、1一直是我國(guó)流行的優(yōu)勢(shì)血清型，但近年來(lái)在我國(guó)關(guān)于DHAV-3的流行和DHAV-1與DHAV-3共流行的的報(bào)道越來(lái)越來(lái)，涉及的地區(qū)也越來(lái)越多，特別是DAstV-1在我國(guó)的出現(xiàn)又進(jìn)一步增加了鴨病毒性肝炎的防治難度。為深入了解DAstV-1基因組變異情況，本研究對(duì)1株DAstV-1山東分離株WF1202進(jìn)行了全基因組序列測(cè)定分析與單因子血清的制備。
　　1、鴨星狀病毒W(wǎng)F1202株的分離鑒定及全基因組測(cè)序與分析
　　本研究應(yīng)用RT

3、-PCR方法擴(kuò)增了Dastv-1中國(guó)山東濰坊分離株WF1202的不同核酸片段，并對(duì)其進(jìn)行了全基因組序列測(cè)定與分析。測(cè)序結(jié)果表明，該株毒具有星狀病毒基因的典型特征:在RF1a和ORF1b的重疊區(qū)存在一個(gè)7堿基滑動(dòng)序列AAAAAAC，其下游存在一個(gè)可配對(duì)形成頸環(huán)結(jié)構(gòu)的序列。序列分析結(jié)果表明該毒株與山東濰坊WF1201株的親緣關(guān)系較近，全基因組核苷酸具有99.4％的同源性。
　　2、單因子血清的制備與特異性檢測(cè)
　　本研究根據(jù)DA

4、stV-1的GenBank已知序列信息，設(shè)計(jì)了1對(duì)特異性引物，通過(guò)RT-PCR方法擴(kuò)增DAstV-1 WF1202株ORF2全長(zhǎng)基因片段，并將ORF2定向克隆到原核表達(dá)載體pET-32a(+)中，得到的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌Rosetta(DE3)PLys中，利用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)得到大小為102KD的融合蛋白;Western blot分析發(fā)現(xiàn)該重組蛋白能與抗Dastv-1陽(yáng)性血清進(jìn)行反應(yīng)，具有良好的免疫學(xué)活性。用純化的重組蛋白作為抗原免