2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、東方巴貝斯蟲(Babesia orientalis)是一種經(jīng)鐮形扇頭蜱傳播的重要血液原蟲,是由本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)并命名的一個(gè)巴貝斯蟲新種,主要引起水牛巴貝斯蟲病。該病在我國長江以南許多省份發(fā)生和流行,臨床上患病牛以高熱、貧血、黃疸和血紅蛋白尿等為特征,甚至引起死亡,造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。
   本研究首先利用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的Babesia orientalis cDNA文庫,進(jìn)行了B.orientalis EST序列的測定和分析,并對所得

2、的EST序列結(jié)果進(jìn)行電子克隆延伸,針對EST的分析結(jié)果和延伸結(jié)果,選取線粒體基因進(jìn)行克隆和測序,并進(jìn)一步構(gòu)建了細(xì)胞色素b基因的系統(tǒng)發(fā)育樹。
   (1)B.orientalis EST序列的測定和分析
   從B.orientalis cDNA文庫中隨機(jī)挑取噬菌斑,轉(zhuǎn)染Bm25.8,經(jīng)PCR鑒定后將插入片段大于300 bp的陽性克隆子測序,共測定了1514條B.orientalis EST序列,對有效EST序列運(yùn)用phr

3、ap等軟件進(jìn)行拼接,聚類后BLAST分析,得到1171個(gè)同源性較高的unigene,這些基因分別為:線粒體基因、RNA結(jié)合蛋白、類紅細(xì)胞表面抗原、類裂殖體表面抗原、代謝相關(guān)的磷酸酶及蛋白酶、衰老相關(guān)蛋白、核糖體蛋白、熱休克蛋白70、類熱休克蛋白90、肌動蛋白、鋅指蛋白、cGMP依賴蛋白激酶等基因的部分或全基因及功能未知的假定蛋白(hypothetical protein)基因部分或全基因;并且推測出共計(jì)5條可能的代謝途徑,包括氧化磷酸化

4、代謝途徑、核糖體途徑、細(xì)胞因子受體途徑、細(xì)胞凋亡途徑、抗體加工及呈遞途徑等多種代謝途徑。
   (2)B.orientalis EST序列的電子克隆延伸和分析
   對所得的1514條EST序列逐條進(jìn)行電子克隆延伸,其延伸長度由原來EST序列平均長度的593.7 bp延長至819 bp,延長了約1.4倍。83條可能的新基因中,與原蟲具有同源性的基因數(shù)有15條,另外有69條EST序列與原蟲有關(guān),對其中51條進(jìn)行了完全電子克

5、隆的延伸。
   (3)B.orientalis線粒體基因的克隆、測序和生物信息學(xué)分析
   根據(jù)獲得的EST序列分析結(jié)果和電子克隆分析結(jié)果,選取了轉(zhuǎn)錄豐度非常高的線粒體基因作進(jìn)一步研究,其編號為Contig18,設(shè)計(jì)特異引物對這條候選序列各基因進(jìn)行克隆和測序,只有少部分由于線粒體的自身特點(diǎn)無法測序得到,從而證實(shí)了電子克隆的有效性。同時(shí)還對線粒體上的各個(gè)基因做了分析,并對細(xì)胞色素b基因進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育分析,并結(jié)合原蟲的18

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