不同季節(jié)虎杖根莖與莖葉中大黃素含量變化研究

1、<p>　　不同季節(jié)虎杖根莖與莖葉中大黃素含量變化研究</p><p>　　作者：胡冠宇,夏醒醒,尹政,陳勤</p><p>　　【摘要】 目的 通過測定藥用植物虎杖在不同季節(jié)時其不同生長部位中的有效成分大黃素含量及其變化規(guī)律,旨在為虎杖的最佳采收時間提供依據(jù)。方法 采用高效液相色譜法,Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,甲醇-0

2、.1%磷酸(80∶20)為流動相；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：27 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。結(jié)果 通過測定不同季節(jié)虎杖的莖葉與根中的大黃素含量,發(fā)現(xiàn)根中大黃素含量最高,且大黃素含量在8月最高。結(jié)論 虎杖在生長發(fā)育過程中,大黃素含量變化是有規(guī)律的,可根據(jù)其根中的大黃素含量確定最佳的采收時間。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 虎杖；大黃素；采收時間；高效液相色譜法</p>

3、<p>　　Abstract：Objective To find the changing regularity of emodin content in different tissues of Polygonum cuspidatum gathered in different seasons by HPLC, so to decide the best gathering time. Methods The sepa

4、ration was performed on Diamonsil-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column, using methanol-0.1%H3PO4 (80∶20) as mobile phase, detected at 254 nm. The flow rate was 1.0 mL/min, the column temperature was 27 ℃. Results Among

5、the rhizome and stem leaf of Polygonum cuspidatum, the content of emodin in th</p><p>　　Key words：Polygonum cuspidatum；emodin；gathering time；HPLC</p><p>　　虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)是

6、蓼科蓼屬多年生草本植物,在我國有廣泛的分布,常見于江蘇、浙江、安徽、山東、廣東、廣西、四川、陜西、云南、貴州等地。傳統(tǒng)藥用部分為其干燥根和根莖,性味苦寒,具有祛風(fēng)利濕、祛痰止咳、清熱解毒、活血化瘀等功效。其主要化學(xué)成分有蒽醌、酚性物質(zhì)及黃酮類化合物等,其中蒽醌類化合物主要有大黃素、大黃素甲醚、大黃酚等。大黃素有較廣泛的生物活性,具有抑菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等作用[1]。由于大黃素具有顯著的藥理學(xué)功效,故有著廣泛的應(yīng)用。</p&

7、gt;<p>　　傳統(tǒng)經(jīng)驗認(rèn)為,大多數(shù)根莖類中藥都在春秋季節(jié)時采挖,因為在這個季節(jié)里中藥材中的有效成分往往貯藏于根中?！吨兴幋筠o典》也記載虎杖的根及根莖應(yīng)在春秋二季采挖[2]。然而,植物在其生長發(fā)育過程中,體內(nèi)合成的次生代謝物質(zhì)(包括有效成分或稱生物活性成分)隨著季節(jié)的變化,其不同生長部位的含量可能存在很大的差異,僅憑經(jīng)驗?zāi)Ｊ讲赏?并不一定適合所有的中藥材,藥材質(zhì)量也就無法得到保證。本試驗采用高效液相色譜(HPLC)法測定

8、虎杖的根莖和葉部位中大黃素的含量,通過跟蹤觀測安徽合肥地區(qū)3－9月間虎杖中大黃素含量的動態(tài)變化,以期為確定虎杖的最佳采收季節(jié)提供依據(jù)。</p><p><b>　　1 材料</b></p><p>　　Agilent 1100 series 高效液相色譜儀；色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；Agilent色譜化學(xué)工

9、作站。大黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,供含量測定用,批號756-9203)；虎杖藥材采于安徽省委黨校植物園,經(jīng)本實驗室鑒定為虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.。甲醇為色譜純；水為重蒸水；其余試劑均為分析純。</p><p><b>　　2 方法與結(jié)果</b></p><p><b>　　2.1 色譜條件&l

10、t;/b></p><p>　　色譜柱：Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：甲醇-0.1%磷酸(80∶20)；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：27 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。</p><p>　　2.2 對照品溶液的配制</p><p>　　精密稱取大黃素對照品1.0 mg,以甲醇溶解

11、并定容至10 mL,搖勻,配成100 μg/mL的溶液。</p><p>　　2.3 供試品溶液的制備[3]</p><p>　　取虎杖莖葉與根適量,分別干燥研細(xì),過60目篩,精密稱取約0.1 g,加入三氯甲烷25 mL和2.5 mol/L硫酸溶液20 mL,稱定重量,置80 ℃水浴回流2 h,冷卻后稱重,用三氯甲烷補足失重,搖勻,分取三氯甲烷,精密量取10 mL,水浴蒸干,殘渣加甲醇使

12、溶解,定容至10 mL,用0.45 μm微孔濾膜濾過,備用。</p><p>　　2.4 線性關(guān)系試驗</p><p>　　取100 μg/mL的對照品溶液,用甲醇稀釋為100、16.67、8.33、1.67、0.83 μg/mL,按上述色譜條件測定,每個濃度重復(fù)3次,進(jìn)樣量為20 μL。以對照品峰面積積分值為縱坐標(biāo),以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為：Y＝134 405X＋1

13、6.119(R＝0.999 9)。表明大黃素在0.83～100 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。</p><p>　　2.5 精密度試驗</p><p>　　精密吸取同一對照品溶液20 μL,重復(fù)進(jìn)樣5次,測定大黃素的峰面積值,RSD＝1.83%,表明儀器精密度良好。</p><p>　　2.6 穩(wěn)定性試驗</p><p>　　將待測樣

14、品溶液在室溫下貯存,在相同的色譜條件下,每隔2 h進(jìn)樣1次,共5次,測定大黃素的峰面積值,RSD＝0.91%,表明該樣品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。</p><p>　　2.7 重復(fù)性試驗</p><p>　　取同一代樣品5份,每份0.1 g,精密稱取,按“2.3”項中的方法處理,測定大黃素的峰面積值,結(jié)果大黃素峰面積值RSD＝1.85%。結(jié)果表明重復(fù)性良好。</p><

15、;p>　　2.8 加樣回收率試驗</p><p>　　采用加樣回收法。精密稱取已知含量(21.609 μg/mL)的樣品,分別精密加入一定量的大黃素(8.333 μg/mL)對照品,按正文樣品溶液的制備方法及上述的色譜條件,依法測定峰面積,計算回收率。結(jié)果見表1。表1 加樣回收率試驗結(jié)果(略)</p><p>　　2.9 樣品含量測定</p><p>　

16、　精密稱取干燥虎杖不同組織粉碎品,按“2.3”項下方法制備供試品溶液,吸取20 μL供試品溶液注入高效液相色譜儀,測定含量。結(jié)果見表2,HPLC圖見圖1。表2 樣品中大黃素含量測定結(jié)果(略)</p><p><b>　　3 討論</b></p><p>　　虎杖為多年生草本植物,4月中旬開始展葉,5－8月份為生長旺盛期,8－9月份為花期,一般在10月底部分葉片開始

17、發(fā)黃脫落,11月中旬落完。結(jié)果表明,大黃素平均含量根部明顯高于莖葉。在根中,大黃素含量在3－9月間基本呈遞增趨勢,至8月達(dá)到頂峰；與此同時,莖葉中大黃素含量則呈遞減趨勢。這說明虎杖在生長發(fā)育過程中,其有效成分大黃素的生成量最高出現(xiàn)在葉中(3月份),隨后,呈下降趨勢,而此時根莖中卻是全年最低點；隨后根莖中的大黃素含量逐漸升高,至4月份時,根莖中的大黃素含量就明顯超過葉中,8月份時為全年最高點。對于這一情況,我們認(rèn)為有兩種可能：其一,植物在

18、生長發(fā)育過程中,合成次生代謝物質(zhì)的基因在植株不同部位中轉(zhuǎn)錄與表達(dá)的時間不同；其二,生長早期,由于虎杖幼嫩的莖葉營養(yǎng)豐富,物理結(jié)構(gòu)不堅韌,易遭受微生物、食草動物侵襲,大黃素可能在這個時期通過體內(nèi)轉(zhuǎn)運通道從根部轉(zhuǎn)移到莖葉中以起到一種化學(xué)防御作用,而在生長晚期,這種次生代謝產(chǎn)物含量隨器官成熟而逐漸下降貯存于根莖中。這種現(xiàn)象在其他植物中也有發(fā)現(xiàn),例如,喜樹幼葉中喜樹堿含量是成熟葉的100倍[4]。從試驗結(jié)果來看,我們認(rèn)為,虎杖的采收時間應(yīng)在8月

19、份較為適宜。</p><p>　　為了保證試驗結(jié)果的重復(fù)性和可靠性,本試驗樣品均是在植物園的不同樣本區(qū),選擇采樣30株作為樣本,每次采集同一樣本植株上的莖葉和根莖,低溫烘干,混合粉碎成60目細(xì)粉,保證了采樣的代表性。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　　[1] 王淑玲,孫云廷,劉昱霞,等.大黃素的藥理學(xué)研究近況

20、[J].中成藥, 2007,29(6)：877－879.</p><p>　　[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1977.1329－1330.</p><p>　　[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2000.146.</p><p>　　[4] 劉文哲,王自芬.喜樹幼枝的喜樹堿積