何首烏中大黃素的生物轉(zhuǎn)化及產(chǎn)物活性初步研究.pdf

1、中藥炮制的現(xiàn)代化是中藥現(xiàn)代化的重要組成部分,中藥炮制發(fā)酵法是中藥炮制的一種重要方法。中藥炮制發(fā)酵法,可以提高中藥療效、降低毒性,產(chǎn)生新的作用。但傳統(tǒng)中藥發(fā)酵法是自然發(fā)酵,不能有目的選擇菌種和闡述中藥發(fā)酵法炮制的機(jī)理,發(fā)酵條件不易控制,常常出現(xiàn)污染,限制中藥發(fā)酵法在中藥資源開發(fā)中的應(yīng)用。用微生物轉(zhuǎn)化的方法炮制處理中藥,可以更好地可以比傳統(tǒng)的物理、化學(xué)等手段更大幅度的對中藥有效成分進(jìn)行轉(zhuǎn)化修飾,可能使微生物發(fā)酵炮制后的中藥產(chǎn)生新的藥理作用,

2、從而改變藥性,擴(kuò)大中藥的療效；微生物轉(zhuǎn)化的溫和條件也可以在炮制過程中最大限度的減少有效成分的破壞,從而更好的發(fā)揮中藥藥效作用。 何首烏為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum的干燥塊根,是我國常用的傳統(tǒng)補(bǔ)益藥,有悠久的藥用歷史,各方面研究均較為深入。本論文選用中藥何首烏(polygonum multiflorum)和何首烏中主要葸醌類成分大黃素作為微生物轉(zhuǎn)化的研究對象。本論文利用搖床發(fā)酵法發(fā)酵何首烏、用HPLC

3、、UV等檢測方法測定發(fā)酵前后葸醌類含量的變化情況,初步篩選出菌種米根霉Rhizopus oryzea、菌株XMS-010對何首烏中蒽醌類成分有一定的降解作用,而對何首烏中有效成分二苯乙烯苷沒有影響。通過米根霉肋Rhizopus oryzae、菌株XMS-010兩菌種對大黃素?fù)u瓶發(fā)酵法轉(zhuǎn)化,分離鑒定得到化合物B,波譜分析為大黃素-6-0-B-D-吡哺葡萄糖苷,得率為5.3﹪.轉(zhuǎn)化產(chǎn)物通過TLC分析表明不是由轉(zhuǎn)化菌產(chǎn)生,而是通過微生物轉(zhuǎn)化形

4、成的,同時該轉(zhuǎn)化過程可能是一個需要活體菌種參與的較為復(fù)雜的過程。大黃素轉(zhuǎn)化后的發(fā)酵液中的結(jié)合型大黃素和游離型大黃素UV測定結(jié)果表明,大黃素在轉(zhuǎn)化過程中也會被降解,降解率為21.3﹪。同時大黃素轉(zhuǎn)化為結(jié)合型大黃素的轉(zhuǎn)化率為8.6﹪。HPLC分析表明,轉(zhuǎn)化后有新的化合物產(chǎn)生。 利用生物發(fā)酵罐快速大量的制備轉(zhuǎn)化產(chǎn)物大黃素-6-0-β-D-吡喃葡萄糖苷。 將大黃素及轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行了家兔回腸收縮作用、抑菌作用、細(xì)胞毒活性等藥理方面

5、的比較實驗。家兔離體回腸實驗初步研究表明大黃素對家兔回腸收縮作用強(qiáng)于大黃素-6-0-β-D-吡喃葡萄糖苷。大黃素-6-0-β-D-吡喃葡萄糖苷對六種致病菌的抑菌效果要明顯好于大黃素,其中大黃素-6-0-β-D-吡喃葡萄糖苷對肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)有較好的抑制效果。通過 MTT 法測定兩物質(zhì)對ACHN 細(xì)胞的抑制率,實驗結(jié)果表明大黃素和大黃素-6-0-β-D-吡喃葡萄糖苷細(xì)胞毒活性均較弱。