硫酸慶大霉素膠囊抗生素效價(jià)的測(cè)定及評(píng)價(jià)-本科畢業(yè)論文

1、<p>　　***********大 學(xué)</p><p>　　本 科 畢 業(yè) 論 文</p><p>　　題目：硫酸慶大霉素膠囊抗生素效價(jià)的測(cè)定及評(píng)價(jià)</p><p><b>　　姓 名：</b></p><p><b>　　學(xué) 號(hào)：</b></p><p&

2、gt;<b>　　專 業(yè)： </b></p><p><b>　　年 級(jí)： </b></p><p><b>　　完成日期： </b></p><p><b>　　指導(dǎo)教師： </b></p><p>　　本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）獨(dú)創(chuàng)性聲明<

3、;/p><p>　　本人聲明所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，本論文中沒有抄襲他人研究成果和偽造數(shù)據(jù)等行為 。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。</p><p>　　論文（設(shè)計(jì)）作者簽名： 日期： </p>

4、<p>　　本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）使用授權(quán)聲明</p><p>　　海南師范大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）的復(fù)印件和磁盤，允許畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）被查閱和借閱。本人授權(quán)海南師范大學(xué)可以將本畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存、匯編畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）。</p><p>　　論文（設(shè)計(jì)）作者簽名：

5、 日期： </p><p>　　指 導(dǎo) 教 師 簽 名： 日期： </p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　摘要………………………………………………………………………………1</p><p>&l

6、t;b>　　1.前言2</b></p><p>　　2. 材料與方法3</p><p>　　2.1實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備3</p><p>　　2.1.1實(shí)驗(yàn)材料3</p><p>　　2.1.2培養(yǎng)基配方4</p><p>　　2.1.3實(shí)驗(yàn)試劑4</p><p>　

7、　2.1.4實(shí)驗(yàn)儀器4</p><p><b>　　2.2實(shí)驗(yàn)方法4</b></p><p>　　2.2.1短小芽孢桿菌菌懸液的制備4</p><p>　　2.2.2培養(yǎng)皿的選擇5</p><p>　　2.2.3操作環(huán)境系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)5</p><p>　　2.2.4磷酸緩沖溶液的選擇5&

8、lt;/p><p>　　2.2.5 平均裝量6</p><p>　　2.2.6標(biāo)準(zhǔn)品與供試品溶液的制備6</p><p>　　2.2.7雙碟的制備7</p><p>　　2.2.8放置牛津杯8</p><p>　　2.2.9滴加抗生素8</p><p>　　2.2.10抑菌圈測(cè)定儀的使用

9、9</p><p><b>　　3.結(jié)果與分析9</b></p><p>　　3.1操作環(huán)境系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)9</p><p><b>　　3.2緩沖體系9</b></p><p>　　3.3 平均裝量11</p><p>　　3.4試驗(yàn)菌濃度11</p>

10、<p>　　3.5樣品測(cè)試結(jié)果12</p><p>　　3.5.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖12</p><p>　　3.5.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)13</p><p><b>　　3.6 討論16</b></p><p><b>　　4.結(jié)論17</b></p><p>&l

11、t;b>　　致謝17</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)18</b></p><p>　　硫酸慶大霉素膠囊抗生素效價(jià)的測(cè)定及評(píng)價(jià)</p><p>　　作者： 指導(dǎo)老師： </p><p>　　摘 要：為了解我市某藥品生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的硫酸慶大霉素膠囊質(zhì)量是否合格，本研究采用管碟法對(duì)該抗生

12、素效價(jià)，通過全自動(dòng)抑菌圈測(cè)定儀進(jìn)行效價(jià)分析，結(jié)果表明測(cè)試的2批藥品T131156和T110109的R值分別為0.2659和0.2702，均小于0.273；2批藥品回歸比較均顯著( P < 0.0 1 )，偏離平行均不顯著 (P > 0.0 5 )，標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)品均呈平行直線關(guān)系；2批藥品T131156和T110109的平均可信限率Pt的FL%分別為4.2428%和3.4479%，均小于5%；2批藥品T131156和T1101

13、09的測(cè)定效價(jià)分別為662.0827u/mg和646.1536u/mg，均高于估計(jì)效價(jià)的90%且低于估計(jì)效價(jià)的110%。綜上所述，測(cè)試的2批藥品抗生素效價(jià)均符合藥典要求，質(zhì)量合格。</p><p>　　關(guān)鍵詞：硫酸慶大霉素；抗生素效價(jià)；抑菌圈測(cè)定儀</p><p>　　Abstract：In order to understand whether the quality of Gentam

14、icin sulfate capsules which Produced by a pharmaceutical factory of Hai Kou is qualified or not, we had do the antibiotic titer evaluation analisysed by cylinder-plate method and the Automatic inhibition zone determinato

15、r. The R value of T131156 and T110109 which had determined was 0.2659 and 0.2702, they were all less than 0.273. Comparison of two batches of drugs were significantly regression(P<0.01),no significant deviation from t

16、he</p><p>　　Key words：gentamicin sulfate；antibio tic titer；inhibition zone tester</p><p><b>　　1.前言</b></p><p>　　抗生素微生物效價(jià)測(cè)定是利用抗生素抗菌的程度，作為客觀指標(biāo)來衡量抗生素有效成分的一種方法，是藥典檢定的常規(guī)方法，在國(guó)

17、際上通用。此方法符合臨床應(yīng)用的要求，能確定抗生素的醫(yī)療價(jià)值。隨著儀器設(shè)備的發(fā)展，部分抗生素可以用物理或化學(xué)的方法測(cè)定其含量，但微生物效價(jià)測(cè)定法依然作為抗生素效價(jià)的主要方法并被各國(guó)藥典所采用。抗生素微生物效價(jià)有三種方法：管碟法、稀釋法、比濁法[1]。稀釋法一般用于測(cè)定藥物的 MIC，該方法未被藥典收載過；比濁法儀器設(shè)備要求較高，操作時(shí)菌種很容易被污染，所以一直也沒有被中國(guó)藥典采用；而管碟法卻是是國(guó)際通用法，靈敏度高，具有準(zhǔn)確性重復(fù)性好，易

18、于操作等特點(diǎn)，被廣泛用于進(jìn)行抗生素效價(jià)，其主要原理是將抗生素的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和未知濃度的檢測(cè)品溶液，滴定到放置在含有敏感性試驗(yàn)菌的菌層培養(yǎng)基上的鋼管里，經(jīng)過培養(yǎng)，形成一定大小的抑菌圈，測(cè)量抑菌圈的直徑進(jìn)行抗生素效價(jià)。管碟法分為三種：一劑量法、二劑量法、三劑量法。一劑量法操作較繁瑣，《中國(guó)藥典》在1977年版后該方法已被淘汰。二劑量法屬于反應(yīng)平行線測(cè)定法，反應(yīng)平行線測(cè)定法的原理是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和供試品的劑量反應(yīng)呈線性關(guān)系，且在標(biāo)準(zhǔn)品與供試品所形成

19、的直線</p><p>　　無論采用哪種方法進(jìn)行抗生素微生物效價(jià)，對(duì)操作環(huán)境的潔凈度都有一定的要求，即需對(duì)環(huán)境操作系統(tǒng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。管碟法對(duì)抗生素微生物效價(jià)潔凈度要求為300000級(jí)【3】，我國(guó)GMP及國(guó)標(biāo)GB/T16294-1996均以直徑為90mm平皿在0.5h內(nèi)的最大允許菌落數(shù)為各潔凈區(qū)的沉降菌限度標(biāo)準(zhǔn)。潔凈控制標(biāo)準(zhǔn)如下表：</p><p>　　表1 潔凈控制標(biāo)準(zhǔn)</p>

20、<p>　　如果潔凈區(qū)內(nèi)每個(gè)取樣點(diǎn)的沉降菌含量均小于相應(yīng)級(jí)別下相同測(cè)量時(shí)間的沉降菌最大允許含量，則該環(huán)境符合沉降菌潔凈度的要求，否則，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)清潔和消毒，直到潔凈度符合標(biāo)準(zhǔn)。</p><p>　　在符合標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境操作系統(tǒng)下所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需符合2010年版《中國(guó)藥典》的規(guī)定：標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩條直線應(yīng)相互平行(P>0.05)時(shí)，且可信限率<5%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才是有效的；統(tǒng)計(jì)時(shí)，應(yīng)列舉管碟法中的原

21、始數(shù)據(jù)和數(shù)值范圍，將原始數(shù)據(jù)中的最高值減去最低值得出每一列的數(shù)據(jù)范圍，比率（R）=數(shù)值的最大范圍值/所以數(shù)值范圍的總和，R值不應(yīng)超過0.273【4】，R值是衡量效價(jià)測(cè)定的抑菌圈數(shù)據(jù)是否合理，如果超過了0.273，則需要檢查列中的最大范圍異常反應(yīng)。另規(guī)定，測(cè)定結(jié)果經(jīng)計(jì)算所得的效價(jià)，如低于估計(jì)效價(jià)的90%或高于估計(jì)效價(jià)的110%時(shí)，應(yīng)重新調(diào)整其估計(jì)效價(jià)進(jìn)行試驗(yàn)【5】。 </p><p>　　基于藥典對(duì)抗生素微生物效

22、價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)選用硫酸慶大霉素膠囊進(jìn)行抗生素效價(jià)。硫酸慶大霉素膠囊內(nèi)容物為白色或類白色的粉末或顆粒，計(jì)算其稱樣量需先確定其平均裝量，藥典規(guī)定取藥品10粒，每粒裝量與平均裝量相比較，裝量差異限度應(yīng)在±10%以內(nèi)，超出裝量差異限度的不得多于2粒,并不得有1粒超出限度1倍【6】。</p><p>　　近年來，藥品的質(zhì)量問題所引發(fā)的事故越來越多，已經(jīng)是人類健康所關(guān)注的一重大問題?？股匦缕贩N不斷的涌現(xiàn)和種類越

23、來越多，臨床應(yīng)用也越來越廣，對(duì)該抗生素進(jìn)行效價(jià)測(cè)定檢測(cè)是否符合藥典規(guī)定，對(duì)指導(dǎo)臨床用藥，保證藥物療效等方面具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。</p><p><b>　　2. 材料與方法</b></p><p>　　2.1實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備</p><p><b>　　2.1.1實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p>

24、　　2.1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌種 </p><p>　　短小芽胞桿菌[CMCC（B）63202]</p><p>　　2.1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 </p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)品：硫酸慶大霉素(批號(hào)201403,效價(jià)575.7u/mg,廣州市齊云生物技術(shù)有限公司)</p><p>　　供試品：硫酸慶大霉素普魯膠囊（樣1：批號(hào) T131156， 樣2：

25、批號(hào) T110109，海南普利制藥股份有限公司）</p><p>　　2.1.2培養(yǎng)基配方 </p><p>　　蛋白胨10g，牛肉膏3g ，氯化鈉5g ，瓊脂15～20g ，蒸餾水1000mL， 121℃高壓滅菌30min </p><p>　　2.1.3實(shí)驗(yàn)試劑 </p><p>　　磷酸氫二鉀，磷酸二氫鉀，氫氧化鈉</p&g

26、t;<p>　　2.1.4實(shí)驗(yàn)儀器 </p><p>　　表2 主要儀器設(shè)備信息</p><p><b>　　2.2實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　2.2.1短小芽孢桿菌菌懸液的制備</p><p>　　2.2.1.1 菌種活化 </p><p&g

27、t;　　從-80℃冰箱中將裝有短小芽孢桿菌的塑料管取出，置于冰塊中直到塑料凍管內(nèi)部結(jié)冰全部液化，在超凈工作臺(tái)里將短小芽孢桿菌轉(zhuǎn)接到平板上，置于35℃-37℃的培養(yǎng)箱里培養(yǎng)24h。</p><p>　　2.2.1.2 菌種培養(yǎng) </p><p>　　將已活化好的菌種轉(zhuǎn)接到平板中，在35℃-37℃培養(yǎng)箱里培養(yǎng)7天。</p><p>　　2.2.1.3 菌懸液的制備 &

28、lt;/p><p>　　向已培養(yǎng)了7天的短小芽孢桿菌的平板加入2- 3mL無菌蒸餾水，用涂布棒將菌種洗下，轉(zhuǎn)移到滅過菌的錐形瓶里，置于4℃冰箱里保存?zhèn)溆谩?lt;/p><p>　　2.2.2培養(yǎng)皿的選擇</p><p>　　培養(yǎng)皿底部不平時(shí)，會(huì)使培養(yǎng)基厚度不均勻，培養(yǎng)基厚度大，抑菌圈半徑變小，培養(yǎng)基厚度小，抑菌圈半徑大【8】，容易造成實(shí)驗(yàn)誤差，故應(yīng)該選擇底部平整，厚度均勻且

29、規(guī)格一樣的培養(yǎng)皿。選擇時(shí)，可將培養(yǎng)皿放在水平臺(tái)上，底部墊一層白紙，分別加入3-4mL的水，然后滴加藍(lán)色墨水，觀察藍(lán)色是否深淺一致，如顏色深淺一致則表示培養(yǎng)皿底部平整【9】。</p><p>　　2.2.3操作環(huán)境系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)</p><p>　　操作環(huán)境系統(tǒng)的潔凈度采用沉降菌進(jìn)行檢測(cè)。本次實(shí)驗(yàn)用的是操作室分為兩部分，中間由玻璃門隔開，其中一部分為無菌操作室，另一部分為半無菌操作室，這兩部操作

30、室都設(shè)有紫外滅菌燈。將制備好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂倒在6平皿里，凝固后，將1個(gè)平板放在無菌操作室的超凈工作臺(tái)上，2個(gè)平板放在及無菌室里兩個(gè)不同的位置，剩下3個(gè)平板放在半無菌操作室的三個(gè)不同位置，分別打開平板30min以上，之后置于35℃-37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。</p><p>　　2.2.4磷酸緩沖溶液的選擇</p><p>　　稱取磷酸氫二鉀5.59g，磷酸二氫鉀0.41g，加水蒸餾水1000m

31、L，制成磷酸緩沖液，用NaOH溶液調(diào)整其pH值。2010版的《中國(guó)藥典》規(guī)定效價(jià)硫酸慶大霉素用的磷酸緩沖溶液pH=7.8，且不添加任何物質(zhì)。但有文獻(xiàn)表明，硫酸慶大霉素微生物的效價(jià)測(cè)定，高劑量的抑菌圈直徑大小很難達(dá)到18-22mm，在pH7.8-8.8之內(nèi)，其抑菌圈的大小隨緩沖液pH值的增大而增大，且在緩沖液中加入4%以上的氯化鈉，直徑能達(dá)到18-22mm這個(gè)范圍【10】。為了選擇最適條件的磷酸緩沖液，本實(shí)驗(yàn)做了兩組對(duì)照，一組pH值為7.

32、8不滴加NaCl與滴加NaCl的磷酸緩沖液，另一組pH值為8.4不滴加NaCl與滴加NaCl磷酸緩沖液。</p><p>　　2.2.5 平均裝量</p><p>　　傾出供試品硫酸慶大霉素膠囊的內(nèi)容物迅速稱量，記錄每粒膠囊的重量，每個(gè)批號(hào)分別稱量10粒，并計(jì)算每個(gè)批號(hào)的平均裝量。</p><p>　　表3 供試品的平均裝量</p><p&

33、gt;　　2.2.6標(biāo)準(zhǔn)品與供試品溶液的制備</p><p>　　抗生素吸濕性很強(qiáng)，稱量的時(shí)候很容易吸收操作環(huán)境空氣中的水分而影響精確度，稱量時(shí)要用精確度達(dá)到1/10萬的分析天平快速一次性稱量，稱量完后立即將藥品蓋好，以免吸水。藥品的稱樣量可根據(jù)海南普利制藥有限公司質(zhì)檢部提供的公式計(jì)算：</p><p>　　稱樣量=（R×23.5×638u/mg×平均裝量）／

34、標(biāo)示量。</p><p><b>　　R：一般取值為1</b></p><p>　　23.5×638u/mg：是指藥品要達(dá)到15000個(gè)單位</p><p>　　2.2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備</p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)示量是575.7u/mg，要達(dá)到15000個(gè)單位需要稱量0.026g。稱量前，先將標(biāo)準(zhǔn)

35、品從4℃冰箱取出，置于室內(nèi)待其溫度與室溫平衡后，再稱量0.026g用50mL容量瓶加超純水定容至50mL。充分混勻后，取2mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別用100mL和50mL裝量的磷酸緩沖液稀釋成高濃度為12u/mL、低濃度為6u/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋前，先將已配制好的磷酸緩沖液潤(rùn)洗要稀釋用的容量瓶，量取過濾液的吸管要用過濾液潤(rùn)洗2-3次。</p><p>　　2.2.6.2 供試品溶液的制備</p><

36、p>　　樣1的平均裝量是0.2726g,樣2的平均裝量是0.2675g，代入以上公式得樣1稱樣量=0.4089g，樣2稱樣量=0.40125g。重新拿新的膠囊進(jìn)行稱量，避免藥品吸收水分而影響結(jié)果，稱量好后分別裝入50mL容量瓶加超純水定容至50mL,并用濾紙過濾收集液體，收集液體用的器皿要用過濾液潤(rùn)洗。標(biāo)準(zhǔn)品和供試品所用的磷酸緩沖液應(yīng)是同一瓶，防止?jié)舛然騪H值不一樣而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。稀釋時(shí)和標(biāo)準(zhǔn)品操作方法一樣，需要用磷酸緩沖液潤(rùn)洗要

37、稀釋用的容量瓶和量取過濾液的吸管，分別取2mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別用100mL和50mL裝量的磷酸緩沖液稀釋成高濃度為12u/mL、低濃度為6u/mL的樣液。</p><p>　　2.2.7雙碟的制備</p><p>　　2.2.7.1試驗(yàn)菌濃度的確定 </p><p>　　由于實(shí)驗(yàn)過程中是用平板培養(yǎng)試驗(yàn)菌，沖洗時(shí)沒有固定無菌水的用量，在制備菌層培養(yǎng)基時(shí)無法確定試驗(yàn)菌的濃

38、度，所以可通過加最適量的菌懸液來取得最佳結(jié)果。200mL培養(yǎng)基加菌量范圍是3.5mL-5.5mL【11】,故可先測(cè)試培養(yǎng)基加菌量分別為3.5mL、4mL、4.5mL、5mL所形成的抑菌圈效果哪個(gè)最好，選出最適加菌量。</p><p>　　2.2.7.2制備底層培養(yǎng)基</p><p>　　從無菌操作室里選擇一個(gè)較平的超凈工作臺(tái)，如果超凈工作臺(tái)面凹凸不平，可以在操作臺(tái)上放置一塊大的玻璃板，以保

39、證放置平皿的位置平整。加注底層培養(yǎng)基前，先將滅過菌的培養(yǎng)皿底部平均劃分為4個(gè)區(qū)域，分別標(biāo)注上標(biāo)準(zhǔn)品和供試品的高低濃度，之后用10mL的滅菌大口移液管吸取20mL培養(yǎng)基加注到平整培養(yǎng)皿里，作為底層培養(yǎng)基。加注時(shí)避免培養(yǎng)基溫度太低，防止培養(yǎng)基內(nèi)部結(jié)塊而影響培養(yǎng)基表面水平。</p><p>　　2.2.7.3制備菌層培養(yǎng)基</p><p>　　將已滅菌的200mL裝量的培養(yǎng)基加熱融化后冷卻，注意

40、培養(yǎng)基溫度過高會(huì)使菌種致死，導(dǎo)致無圈或者抑菌圈破圈。細(xì)菌一般是冷卻到48℃-50℃，芽孢可冷卻到60℃左右【12】，加入已經(jīng)制備好的短小芽孢桿菌菌懸液3.5mL-5.5mL,搖勻。用滅菌的10mL大口移液管吸取含有菌液的培養(yǎng)基5mL，注入到底層培養(yǎng)基上，輕輕晃動(dòng)，使含有菌液的培養(yǎng)基均勻的平鋪在底層培養(yǎng)基上，置超凈工作臺(tái)上待凝固備用。</p><p>　　2.2.8放置牛津杯</p><p>

41、;　　用鑷子將已滅菌的牛津杯等距離的放置到制備好的雙碟培養(yǎng)基上，放置后，靜置5-10min，再滴加標(biāo)準(zhǔn)品和供試品溶液。</p><p>　　2.2.9滴加抗生素</p><p>　　每批供試品至少準(zhǔn)備6個(gè)雙碟，用滅過菌的膠頭滴管滴加抗生素溶液，滴加前先用滴加液潤(rùn)洗2-3次。按已經(jīng)劃分好的區(qū)域滴加，滴加順序?yàn)镾H→TH→SL→TL，也可以是SL→TL→TH→SH（S：標(biāo)準(zhǔn)品，T：供試品，H：

42、高濃度，L：低濃度），但由于抑菌圈測(cè)定儀系統(tǒng)固定的檢測(cè)順序是TH→SH→TL→SL,故本次實(shí)驗(yàn)的添加順序沒有按藥典規(guī)定的順序添加，而是根據(jù)抑菌圈測(cè)定儀檢測(cè)順序TH→SH→TL→SL添加抗生素，最終都不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。滴加的溶液應(yīng)與鋼管口平滿，如果過滿，需用膠頭滴管輕微吸取多余的部分，且滴加抗生素的時(shí)間間隔不能太長(zhǎng)，會(huì)引起抗生素?cái)U(kuò)散的時(shí)間不同而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。滴加時(shí)膠頭滴管如果有氣泡或開口端有液體殘留時(shí)，應(yīng)重新吸取溶液滴加，避免滴加過程氣泡

43、破裂或?yàn)R落使培養(yǎng)基表面破圈。滴加完畢后，輕輕的將雙碟平穩(wěn)放入35℃-37℃培養(yǎng)箱，放置雙碟時(shí)應(yīng)保持一定的距離，以免受熱不均勻影響抑菌圈的大小，最后用滅過菌的陶瓷蓋蓋住雙碟，培養(yǎng)16-18h【13】。</p><p>　　2.2.10抑菌圈測(cè)定儀的使用</p><p>　　檢查：檢查軟件鎖、掃描儀數(shù)據(jù)連接線均已正確連接上電腦的USB 接口，掃描儀的安全鎖均處于開鎖狀態(tài)且掃描儀電源處于打開狀態(tài)

44、；</p><p>　　打開：插上測(cè)定儀的密鑰，在桌面上找到抑菌圈自動(dòng)測(cè)定的快捷方式，點(diǎn)擊打開；</p><p>　　設(shè)置：打開設(shè)置頁面，將成像方式選擇掃描儀，選擇六皿；</p><p>　　標(biāo)定：選擇標(biāo)定中的掃描時(shí)自動(dòng)標(biāo)定，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)根據(jù)掃描的分辨率將圖像尺寸與實(shí)際大小進(jìn)行對(duì)應(yīng)；</p><p>　　掃描及分析：用酒精擦掉平皿底部劃分的區(qū)域

45、，分別在雙碟邊緣上標(biāo)出標(biāo)準(zhǔn)品的位置，然后選出6個(gè)雙碟按一定順序安置在掃描儀上進(jìn)行掃描，調(diào)整好每個(gè)目標(biāo)區(qū)的大小及位置，選擇“六皿抑菌圈正片”，點(diǎn)擊執(zhí)行，則抑菌圈的直徑大小均測(cè)量出來。</p><p>　　效價(jià)分析：點(diǎn)擊效價(jià)分析，接著點(diǎn)擊統(tǒng)計(jì)即可得出結(jié)果統(tǒng)計(jì)表。</p><p><b>　　3.結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1操作環(huán)境

46、系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)</p><p>　　表4 沉降菌落數(shù)</p><p>　　從上表4中可知，無菌操作室沉降菌平均菌落數(shù)為0，半無菌操作室平均菌落數(shù)不到1，操作環(huán)境系統(tǒng)達(dá)到100級(jí)，而抗生素微生物效價(jià)要求300000潔凈區(qū)，操作環(huán)境系統(tǒng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)符合潔凈度要求。</p><p><b>　　3.2緩沖體系</b></p><p>

47、　　在不同試驗(yàn)條件下的磷酸緩沖液所形成的抑菌圈直徑大小如下：</p><p>　　表5 磷酸緩沖液pH=7.8的抑菌圈直徑</p><p>　　表6中數(shù)值顯示，pH=8.4的磷酸緩沖液比pH=7.8的磷酸緩沖液所形成的抑菌圈直徑大1-2mm，且數(shù)值大小及差異范圍均比pH=7.8的大。pH=8.4且不滴加NaCl的磷酸緩沖液比率(R)= 0.890/(0.695 + 0.890+ 0.46

48、5+ 0.715)=0.322>0.273；滴加NaCl的磷酸緩沖液比率（R）=0.959/(0.959 + 0.834+ 0.874+ 0.73)=0.282>0.273，pH=8.4的抑菌圈數(shù)值比率均大于0.273，數(shù)值存在異常值，在是否滴加NaCl的數(shù)值范圍上與pH=7.8的情況一樣，不滴加NaCl的磷酸緩沖液比滴加NaCl的磷酸緩沖液所形成的抑菌圈直徑小，但數(shù)值大小差異也小。兩個(gè)不同條件的磷酸緩沖液統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，pH

49、=8.4所形成的抑菌圈直徑大，但出現(xiàn)異常值的機(jī)率也大，pH=7.8且不滴加NaCl的磷酸緩沖液所形成的抑菌圈數(shù)值符合藥典規(guī)定，效果最佳。</p><p><b>　　3.3 平均裝量</b></p><p>　　樣1平均裝量為0.2726，樣2平均裝量為0.2675，每個(gè)批次的每粒裝量與各平均裝量大小相比范圍如表7：</p><p>　　表7

50、 每粒裝量與平均裝量相比大小范圍</p><p>　　慶大霉素膠囊每粒裝量與其平均裝量相比較所得的結(jié)果，所有裝量差異限度都在10%以內(nèi)，符合2010年版《中國(guó)藥典》規(guī)定。</p><p><b>　　3.4試驗(yàn)菌濃度</b></p><p>　　試驗(yàn)菌濃度過低,抑菌圈邊緣會(huì)模糊不清; 試驗(yàn)菌濃度過高會(huì)使抑菌圈太小而影響抗生素效價(jià)【14】。不同加

51、菌量所形成的抑菌圈直徑大小及清晰度如下：</p><p>　　表8 菌懸液用量與抑菌圈直徑及清晰度的關(guān)系</p><p>　　表8數(shù)據(jù)表明，抑菌圈直徑隨菌懸液用量的增加大小變化不大，均在18-22mm范圍內(nèi)。加菌量為4.5mL時(shí)，抑菌圈邊緣很清晰，應(yīng)是最適加菌量。</p><p><b>　　3.5樣品測(cè)試結(jié)果</b></p>

52、<p>　　3.5.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖</p><p>　　圖1 樣1抑菌圈</p><p>　　圖2 樣2抑菌圈</p><p>　　3.5.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)</p><p>　　在結(jié)果統(tǒng)計(jì)前，需檢查抑菌圈直徑大小是否存在異常值，將最大值范圍值和所有數(shù)值范圍的總和代入公式：比率（R）=數(shù)值的最大范圍值/所以數(shù)值范圍的總和，當(dāng)比率

53、（R）<0.273時(shí)，測(cè)定值是合理的。根據(jù)2010年版《中國(guó)藥典》規(guī)定，藥品的測(cè)定效價(jià)應(yīng)高于估計(jì)效價(jià)的90%及低于估計(jì)效價(jià)的110%，兩個(gè)批次的供試品估計(jì)效價(jià)都是638u/mg，即當(dāng)測(cè)定效價(jià)值在574.2 u/mg -701.8u/mg這個(gè)范圍內(nèi)，所檢測(cè)的藥品是合格的。</p><p>　　表9 樣1結(jié)果統(tǒng)計(jì)表</p><p>　　發(fā)報(bào)告日期：04/07/2014

54、14:40:48</p><p>　　實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：硫酸慶大霉素膠囊效價(jià)測(cè)定 </p><p>　　檢品名稱：慶大霉素普魯卡因膠囊</p><p>　　批號(hào)： T131156</p><p>　　樣1統(tǒng)計(jì)表顯示：比率（R）=數(shù)值范圍的最大值/所有數(shù)值的范圍總和=0.519/1.952=0.2659，比率0.2659未超過0.273限值，即表

55、中所有抑菌圈直徑測(cè)定值均是合理的；變異來源中的回歸比較顯著( P < 0.0 1 )，偏離平行不顯著 (P > 0.0 5 )，即標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)品呈平行直線關(guān)系；平均可信限率Pt的FL%= 4.2428 %<5% ，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。本實(shí)驗(yàn)的樣1的慶大霉素膠囊測(cè)定效價(jià)是662.0827 u/mg，高于估計(jì)效價(jià)的90%且低于估計(jì)效價(jià)的110%，符合2010年版《中國(guó)藥典》規(guī)定，該藥品合格。</p><p&g

56、t;　　表10 樣2 結(jié)果統(tǒng)計(jì)表</p><p>　　發(fā)報(bào)告日期：04/07/2014 12:16:57</p><p>　　實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：硫酸慶大霉素膠囊效價(jià)測(cè)定</p><p>　　檢品名稱：慶大霉素普魯卡因膠囊</p><p>　　批號(hào)： T110109</p><p>　　樣2結(jié)果統(tǒng)計(jì)表中顯

57、示：比率（R）=數(shù)值范圍的最大值/所有數(shù)值的范圍=0.500/1.850=0.2702，小于0.273,故統(tǒng)計(jì)表中所有測(cè)定值均是合理的；回歸比較顯著( P < 0.0 1 )，偏離平行不顯著 (P > 0.0 5 )，標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)品呈平行直線關(guān)系,平均可信限率Pt的FL%= 3.4479%<5% ，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。樣2的測(cè)定效價(jià)是646.1536 u/mg，高于估計(jì)效價(jià)的90%且低于估計(jì)效價(jià)的110%，符合2010年版《

58、中國(guó)藥典》規(guī)定，該藥品合格。</p><p><b>　　3.6 討論</b></p><p>　　抗生素微生物效價(jià)測(cè)定的操作步驟比較繁瑣，影響因素較多，任何一個(gè)環(huán)節(jié)操作不當(dāng)或粗心大意都造成很大的誤差，甚至?xí)?dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)的失敗。如加菌量過少，抑菌圈邊緣模糊，加菌量過多，抑菌圈直徑變??；磷酸緩沖溶液pH值過高或過低，對(duì)效價(jià)結(jié)果影響也很大；試驗(yàn)菌的濃度、抗生素稱樣量、培養(yǎng)

59、溫度、培養(yǎng)時(shí)間等也會(huì)有所影響，除了這些因素外，可能還存在其他因素，只有不斷進(jìn)行具體實(shí)驗(yàn)研究，才能不斷認(rèn)識(shí)和掌握問題所在和找到解決方法，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更接近真實(shí)值，誤差更小。</p><p><b>　　4.結(jié)論</b></p><p>　　用管碟法對(duì)硫酸慶大霉素膠囊進(jìn)行抗生素效價(jià)，得出了其最適的實(shí)驗(yàn)方案：加菌量4.5mL,緩沖液pH=7.8且不添加任何物質(zhì)，在36℃培養(yǎng)箱

60、里培養(yǎng)16個(gè)h，得到抑菌圈邊緣較清晰，標(biāo)準(zhǔn)品高劑量的抑菌圈直徑都在18-22mm范圍內(nèi)。經(jīng)過抑菌圈測(cè)定儀測(cè)定供試品兩個(gè)批次的抗生素的比率（R）都小于0.273，回歸比較顯著( P < 0.0 1 )，偏離平行不顯著 (P > 0.0 5 )，平均可信限率小于5%，符合2010年《中國(guó)藥典》的規(guī)定，這兩個(gè)批次的慶大霉素膠囊均合格，也證實(shí)了抗生素效價(jià)的準(zhǔn)確性及有效性。</p><p><b>　

61、　致謝</b></p><p>　　論文在一個(gè)月的時(shí)間里不斷的修改，終于畫上了完美的句號(hào)。在這，我非常感謝我的導(dǎo)師—吳**老師。</p><p>　　本次論文課題學(xué)校沒有開設(shè)過，大三的時(shí)候就聯(lián)系吳老師說要做藥品檢測(cè)方面的實(shí)驗(yàn)，想提前做畢業(yè)論文，吳老師很熱情很爽快的答應(yīng)了。但很慚愧，由于種種原因，事隔一年才開始動(dòng)手，辜負(fù)了老師的期望。在最后的這幾個(gè)月里，基于吳老師的精心講解與耐心

62、指導(dǎo)下，實(shí)驗(yàn)做的很順利，所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果很樂觀。論文從初稿到定稿，吳老師不厭其煩的指導(dǎo)和幫助我反復(fù)修改，直到順利完成。跟吳老師學(xué)習(xí)的這段時(shí)間，讓我受益匪淺，從吳老師身上不僅學(xué)到了很多專業(yè)知識(shí)，更感受到他在工作中兢兢業(yè)業(yè)，在生活中平易近人，他嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度和忘我的工作精神都值得我去學(xué)習(xí)，非常感謝吳老師無私的幫助，感謝您的默默奉獻(xiàn)，您的盡職盡責(zé)，在這里請(qǐng)接收我誠(chéng)摯的謝意。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)

63、</b></p><p>　　[1] 郭福慶.抗生素微生物效價(jià)檢定法及其影響因素.天津藥學(xué)，2000,12（4）：53.</p><p>　　[2] 金錄勝.管碟法測(cè)定抗生素效價(jià)中抑菌圈圓正及清晰度的控制.中國(guó)獸藥雜志,1992,27（2）：38.</p><p>　　[3] 常任厚.抗生素效價(jià)測(cè)定中影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素探討.江蘇藥學(xué)與臨床研究,1999,

64、7（4）：60.</p><p>　　[4] 潘友文.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)工業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理與驗(yàn)證技術(shù).北京.中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2004:107.</p><p>　　[5] 國(guó)家藥典委員會(huì).抗生素微生物檢定法.中華人民共和國(guó)藥典[ M ] .二部.北京： 化 學(xué)工業(yè)出版社, 2010： 附錄93 </p><p>　　[6] 國(guó)家藥典委員會(huì).膠囊劑.中華人民共和國(guó)

65、藥典[ M ] .一部.北京： 化 學(xué)工業(yè)出版社,2010：附錄Ⅰ L </p><p>　　[7] 郭家瑞,王衛(wèi)國(guó),李 磊, 何泓良.慶大霉素研究概述.海峽藥學(xué),2009，21 （10）：7.</p><p>　　[8] 黃英.管碟法測(cè)定抗生素效價(jià)的影響因素分析.中國(guó)藥師,2005,8（8）：689.</p><p>　　[9] 郭家瑞,王衛(wèi)國(guó). 慶大霉素研概述

66、. 海峽藥學(xué),2009,21(10):5</p><p>　　[10] 汪穗福.微生物檢測(cè)驗(yàn)證技術(shù).中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2005:175.</p><p>　　[11] 汪穗福,微生物檢測(cè)驗(yàn)證技術(shù).中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2005:175.</p><p>　　[12] 金錄勝.管碟法測(cè)定抗生素效價(jià)中抑菌圈圓正及清晰度的控制.中國(guó)獸藥雜志,1992,27（2）：38.&