重組人角質(zhì)細胞生長因子2對大鼠機械通氣所致肺損傷的保護作用及其機制.pdf

1、第一部分重組人角質(zhì)細胞生長因子2對大鼠機械通氣所致肺損傷的保護作用
　　目的：本實驗通過建立大鼠機械通氣肺損傷模型,旨在研究重組人角質(zhì)細胞生長因子-2對機械通氣所致肺損傷的保護作用。
　　方法：實驗選用SPF級雄性SD大鼠40只,隨機分成四組:Control組為正常對照組:大鼠僅行氣管插管,不行機械通氣;LV組為小潮氣量機械通氣組(參數(shù)設(shè)置:潮氣量=6ml/kg,RR=70次/分,PEEP=3cmH2O,FiO2=21％);

2、VILI組為大潮氣量機械通氣即機械通氣肺損傷組(參數(shù)設(shè)置:潮氣量=20ml/kg,RR=70次/分,PEEP=OemH2O,FiO02=21％);rhKGF-2+VILI組為機械通氣肺損傷+rhKGF-2預(yù)先給藥治療組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時后再行大潮氣量機械通氣,參數(shù)同VILI組)。所有動物在機械通氣4小時后放血處死,收集標本,行動脈血氣分析,并檢測肺濕干比(W/D),行支氣管肺泡灌洗,檢測支氣管肺

3、泡灌洗液(BALF)中蛋白濃度,BALF中有核細胞總數(shù)及中性粒細胞計數(shù),觀察光鏡(HE染色)及電鏡下肺組織病理改變并行肺損傷評分。
　　結(jié)果：機械通氣4小時后VILI組PaO2(mmHg)與Control組及LV組相比均明顯降低(p＜0.05),而rhKGF-2+VILI組PaO2較VILI組明顯升高(p＜0.05),LV組PaO2與Control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。VILI組肺W/D、肺損傷評分、BALF中有

4、核細胞總數(shù)及中性粒細胞計數(shù)(×105/m1)及BALF中蛋白濃度(ug/ml)與Control組及LV組相比均明顯升高(p＜0.05),rhKGF-2+VILI組上述指標均較VILI組明顯降低(p＜0.05),LV組上述指標與Control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。VILI組光鏡下可見肺泡間隔增厚,有較多炎癥細胞浸潤,肺泡腔內(nèi)可見大量水腫液并有紅細胞和中性粒細胞滲出;電鏡下可見肺上皮細胞嚴重破壞、基底膜破損間斷、肺泡-毛細

5、血管屏障斷裂不連續(xù)。而rhKGF-2+VILI組肺組織損傷程度較VILI組明顯減輕。LV組肺組織病理變化與Control組無明顯差別。
　　結(jié)論：1.健康大鼠接受20ml/kg潮氣量通氣4h可出現(xiàn)機械通氣肺損傷。2.機械通氣前72小時給予5mg/kg重組人角質(zhì)細胞生長因子-2氣道內(nèi)滴注給藥可以有效減輕機械通氣對肺組織的損傷程度,起到較好的保護作用。
　　第二部分重組人角質(zhì)細胞生長因子2對大鼠機械通氣所致肺損傷的保護機制研究<

6、br>　　目的：本實驗通過研究rhKGF-2對VILI大鼠肺組織MP0活性、BALF中炎癥因子、肺泡Ⅱ型上皮細胞數(shù)目及表面活性物質(zhì)蛋白的影響,旨在探討rhKGF-2對大鼠機械通氣所致肺損傷可能的保護機制。
　　方法：實驗選用SPF級雄性SD大鼠40只,隨機分成四組:Control組為正常對照組(大鼠僅行氣管插管,不行機械通氣),rhKGF-2組為單純rhKGF-2給藥組(rhKGF-2按5mg/kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時后

7、行氣管插管,不行機械通氣),VILI組為機械通氣肺損傷組(參數(shù)設(shè)置:FiO2=21％,VT=20ml/kg,PEEP=OcmH2O,RR=70次/分),rhKGF-2+VILI組為機械通氣肺損傷+rhKGF-2預(yù)先給藥治療組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時后再行大潮氣量機械通氣,參數(shù)同VILI組)。所有動物在機械通氣4小時后經(jīng)頸動脈放血處死,檢測肺組織髓過氧化物酶(MPO)活性,ELISA法測定肺泡灌洗液(B

8、ALF)中TNF-α及MIP-2的含量,Realtime PCR檢測肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,Western blot法測定肺組織中表面活性蛋白C(SP-C)水平,SP-C免疫組化染色檢測肺泡Ⅱ型上皮細胞增殖情況。
　　結(jié)果：VILI組肺組織MPO活性、BALF中TNF-α及MIP-2的含量均較Control組明顯增高(p＜0.05),而rhKGF-2+VILI組MP0活性、BALF中TNF-α及MIP-2

9、的含量均較VILI組明顯降低(p＜0.05),rhKGF-2組上述指標與Control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);VILI組肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,表面活性蛋白C(SP-C)水平及肺泡上皮細胞SP-C標記指數(shù)均較Control組明顯降低(p＜0.05),而.rhKGF-2+VILI組肺組織SP-A、SP.B、SP-C mRNA水平,SP-C蛋白水平及肺泡上皮細胞SPC標記指數(shù)均較VILI組明顯升高(