蓖麻株高性狀的RAPD分子標(biāo)記研究.pdf

1、本研究以蓖麻高、矮桿親本為供試材料，利用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)結(jié)合BSA法，篩選與株高基因相關(guān)的分子標(biāo)記。主要研究結(jié)果如下： 1.采用CTAB法成功地提取了蓖麻基因組DNA。通過對RAPD-PCR影響因素的分析，優(yōu)化了適合本研究的RAPD-PCR體系及擴(kuò)增程序。反應(yīng)體系為：25μl體系中含引物0.36μnol/L、dNTP0.24mmol/L、Taq酶0.05U/μl、Mg2+1.2mmol/L。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性2min；

2、94℃變性45s，36℃退火45s，72℃延伸75s，35個循環(huán)；最后72℃復(fù)延伸5min。 2.利用200個10bp隨機(jī)引物對高稈親本基因池和矮桿親本基因池間進(jìn)行RAPD多態(tài)性分析，共擴(kuò)增出1021條DNA譜帶，每個引物可擴(kuò)增譜帶數(shù)2～13條，譜帶大小200bp-2000bp。最終選出1個在高、矮親本植株間產(chǎn)生差異性擴(kuò)增譜帶的引物-S1500，并利用該引物標(biāo)記出2個與株高性狀相關(guān)基因的差異片段。通過進(jìn)一步在群體上進(jìn)行驗(yàn)證，確認(rèn)

3、了這2個標(biāo)記片段的真實(shí)性。根據(jù)這2個標(biāo)記片段的長度將其命名為S15002200和S15001600。 3.將S15002200和S15001600差異片段切膠回收，連接到pGEM-T Easy克隆質(zhì)粒載體上，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109，經(jīng)質(zhì)粒酶切鑒定后并測序，獲得了該標(biāo)記的核苷酸序列，其大小分別為S15002200：2242bp和S15001600：1690bp。并將其命名為S15002242和S15001690。 4.在