38個(gè)甜菜品種RAPD分析及重要農(nóng)藝性狀分子標(biāo)記的研究.pdf

1、本試驗(yàn)分別以SNG5(單粒種高糖)×H102(單粒種低糖)，L242(低產(chǎn))×L236(高產(chǎn))，SAT4406(耐鹽)×SAT452(不耐鹽)雜交獲得的112株、154株、174株F<,2>代群體為試材，利用RAPD、SSR技術(shù)對其相應(yīng)性狀進(jìn)行研究。旨在尋找與甜菜高糖、高產(chǎn)和耐鹽基因分別緊密連鎖的分子標(biāo)記。主要研究結(jié)果如下： 1 采剛CTAB法、SDS法、改進(jìn)CTAB法和改進(jìn)SDS法提取甜菜總DNA，并對提取得到的DNA進(jìn)行質(zhì)量

2、鑒定和PCR擴(kuò)增效果檢測。結(jié)果表明：用改進(jìn)的CTAB法提取的DNA OD<,260>/OD<,280>在1.8左右，DNA純度好，產(chǎn)率高，CTAB法和改進(jìn)的SDS法產(chǎn)率次之，SDS法最低。同時(shí)對改進(jìn)的CTAB法的提取條件進(jìn)行優(yōu)化，即用5.0 mL細(xì)胞提取液，0.8mL無水乙醇，0.6倍體積的異丙醇，可從1.0g甜菜葉片中提取到高質(zhì)量高純度的DNA 764 μg/g。 2 采用正交設(shè)計(jì)對甜菜的RAPD反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化。應(yīng)用L<,2

3、5>(5<'6>)正交表，研究了Taq、Mg<'2+>、隨機(jī)引物、dNTPs和DNA模板5種RAPD反應(yīng)組分濃度變化對擴(kuò)增結(jié)果的影響，并比較了瓊脂糖凝膠和聚丙烯酞胺凝膠體系在檢測擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性方面的差異。結(jié)果表明用這種方法建立的甜菜RAPD-PCR優(yōu)化反應(yīng)體系為：25μL反應(yīng)體系中含1×Buffer、1.0mmol/L Mg<'2+>、lU Taq DNA聚合酶、0.25mmol/L dNTPs、0.4 μmol/L隨機(jī)引物、25ng

4、DNA模板。 3 為摸索適宜甜菜的SSR反應(yīng)體系，分析了PCR反應(yīng)體系中的Mg<'2+>濃度、dNTP濃度、DNA模板濃度、引物濃度、Taq聚合酶濃度對擴(kuò)增結(jié)果的影響，結(jié)果表明：在20μ L反應(yīng)體系中含1×Buffer、2.0mmol/L Mg<'2+>、1.5U Taq DNA聚合酶、0.20mmol/L dNTPs、1.5 μmol/L隨機(jī)引物、60ng/μ LDNA模板。 4 本文的第二部分應(yīng)用RAPD(Rando

5、mly Amplified Polymorphic DNAs，RAPD)分子標(biāo)記技術(shù)對38份不同來源的甜菜品種進(jìn)行比較和分析，對德國、烏克蘭、自育的等38個(gè)材料的遺傳差異進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明：同一個(gè)來源的大多數(shù)品種間的親源關(guān)系較近，但是也存在某個(gè)來源內(nèi)的個(gè)別品種與其它來源的品種親源關(guān)系較近的情況。供試品種L242(低產(chǎn))與L236(高產(chǎn))、SAT4406(耐鹽)與SAT452(不耐鹽)之間親緣關(guān)系很近，可以近似認(rèn)為遺傳背景一致。但SNG

6、5(單粒種高糖)與H102(單粒種低糖)之間遺傳背景不一致。 5 初步篩選出64條RAPD隨機(jī)引物和2對(Cri9，MS0303)SSR引物可用于鑒別SNG5(單粒種高糖)與H102(單粒種低糖)材料；初步篩選出60條RAPD隨機(jī)引物和4對(Cri4，Cri9，MS0402，MS0303)SSR引物可用于鑒別L242(低產(chǎn))與L236(高產(chǎn))材料；初步篩選出20條RAPD隨機(jī)引物和5對(Cri3，Cri4，Cri5，Cri9，C