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文檔簡(jiǎn)介
1、為了解決多種病害對(duì)蘋(píng)果屬海棠的危害,提高其觀賞性和果品質(zhì)量。以32種海棠葉片作為試驗(yàn)材料。使用紫外可見(jiàn)分光亮度計(jì),以福林-肖卡法、三氯化鋁法分別測(cè)其總多酚、總黃酮含量;使用高效液相色譜,分析兒茶素類(lèi)含量,使用SPSS軟件分析總多酚、總黃酮及兒茶素類(lèi)含量,篩選出具有較好體外酶促反應(yīng)的海棠品種,再對(duì)酶促反應(yīng)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化,為后期蛋白質(zhì)分子量分級(jí),縮小兒茶素差向異構(gòu)酶范圍提供實(shí)驗(yàn)材料,為找出抗病害的目的基因打下基礎(chǔ)。
參試的32種
2、海棠葉片中,總多酚含量為10.34~114.31 mg GAE eq./g DW,總黃酮含量為421.39~103.45 mg Rutin eq./100 g DW;兒茶素含量為4.21~245.73 mg/kg DW,表兒茶素含量為11.43~320.78 mg/kg DW。在32種海棠葉片中,同時(shí)含有兒茶素與表兒茶素在150 mg/kg DW的品種分別有西府海棠、湖北海棠、三葉海棠、‘紅麗’海棠、‘雪球’海棠、‘櫻葉’海棠,其中三葉
3、海棠含有的兒茶素(210.53±3.28 mg/kg DW)與表兒茶素(320.78±7.96 mg/kg DW)含量最高;其中綠色葉片的海棠含有兒茶素與表兒茶素的含量相對(duì)較高,彩色葉片的海棠品種含有兒茶素與表兒茶素含量相對(duì)較低。依據(jù)海棠葉片同時(shí)含有兒茶素與表兒茶素,及其兩者之間相對(duì)總量及含量的倍數(shù)關(guān)系,選取三葉海棠、‘雪球’海棠、湖北海棠進(jìn)行體外酶促反應(yīng)試驗(yàn),篩選出已知品種中具有較好酶促反應(yīng)的海棠品種。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:提取的
4、海棠葉片中酶液具有活性;通過(guò)高效液相色譜儀檢測(cè),在波長(zhǎng)280 nm下,分別在26.3min處檢測(cè)出catechin,在29.6min處檢測(cè)出epicatechin。在酶促反應(yīng)中,雪球海棠、三葉海棠、湖北海棠兒茶素分別消耗了204.21、269.11、289.04mg/kg DW,消耗率分別為88.34%、89.97%、92.25%,表兒茶素分別增加了173.75、251.83、279.60mg/kg DW,在酶促反應(yīng)中最佳提取液pH值分
5、別為7.0、7.5、7.5,緩沖液pH值分別為8.5、8.0、8.0。
通過(guò)比較三種海棠葉片兒茶素消耗量及表兒茶素生成量,后期優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件選擇湖北海棠;通過(guò)對(duì)湖北海棠體外酶促反應(yīng)最適條件實(shí)驗(yàn)表明:在1ml反應(yīng)體系下,酶量500μL;緩沖液350μL;底物50μL4μg/mL的catechin;溫度30℃,時(shí)間為45min,50μL的35%TCA終止反應(yīng),catechin消耗了327.68 mg/ kg DW, epicatec
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