慢性排斥反應(yīng)移植腎組織tiaf-1的表達(dá)及其意義

1、<p>　　慢性排斥反應(yīng)移植腎組織TIAF-1的表達(dá)及其意義</p><p>　　作者：周廣臣 何小舟 巢志復(fù) </p><p>　　【摘要】 目的 探討移植腎慢性排斥反應(yīng)（CR）時(shí)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1誘導(dǎo)的抗凋亡因子-1（TIAF-1）的表達(dá)及其意義。方法 采用SP免疫組織化學(xué)染色法對(duì)6例因腎細(xì)胞癌行腎切除的未受腫瘤侵犯的正常腎組織和8例供腎正常腎組織、16例急性排斥反應(yīng)和28

2、例慢性排斥反應(yīng)移植腎組織中TIAF-1的表達(dá)進(jìn)行觀察，并對(duì)間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞中CD3、CD20、CD68陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行分析。結(jié)果 正常供腎組織未見(jiàn)TIAF-1表達(dá)。急性排斥反應(yīng)移植腎間質(zhì)TIAF-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增加，腎小管上皮細(xì)胞呈微弱的TIAF-1表達(dá)。在慢性排斥反應(yīng)移植腎組織中，TIAF-1在間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞中的表達(dá)呈彌漫性、強(qiáng)陽(yáng)性,較多的腎小管上皮細(xì)胞呈高度染色。移植腎間質(zhì)浸潤(rùn)的TIAF-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與CD3和CD20陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)。

3、結(jié)論 TIAF-1在慢性排斥反應(yīng)移植腎組織中的表達(dá)可能與Th1細(xì)胞向Th2細(xì)胞的免疫偏離有關(guān)，移植腎腎小管上皮細(xì)胞的TIAF-1表達(dá)可能反映了某種保護(hù)性機(jī)制的誘導(dǎo)。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 腎移植；慢性排斥反應(yīng)；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1誘導(dǎo)的抗凋亡因子-1 </p><p>　　Abstract: Objective To investigate the characterist

4、ics of TGF-β1-induced antiapoptotic factor-1 (TIAF-1) expression in renal allograft of chronic rejection (CR) and to study the possible pathogenic role of TIAF-1 in chronic allograft rejection. Methods Immunohistochemis

5、try of streptavidin-perosidase (SP) method was applied in the observation of the expression of TIAF-1 in each group, including tissues obtained from the unaffected part of nephrectomized kidneys with renal cell carcinoma

6、 (n=6) a</p><p>　　Key words: renal transplantation; chronic rejection; TGF-β1-induced Anti-apoptotic Factor-1 (TIAF-1) </p><p>　　慢性排斥反應(yīng)（chronic rejection,CR）是器官移植后期移植物失功能的主要原因，制約著移植受體長(zhǎng)期生存率的提高，其確

7、切的發(fā)病機(jī)制目前尚未闡明。研究表明，凋亡在同種異體排斥反應(yīng)中起重要作用，腎移植慢性排斥反應(yīng)與腎小管上皮細(xì)胞凋亡有關(guān)，而凋亡并非僅限于移植組織，移植物浸潤(rùn)的T細(xì)胞亦存在凋亡現(xiàn)象，后者可能下調(diào)受體對(duì)移植物的排斥反應(yīng)［1-3］。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，CR與輔助性T細(xì)胞Ⅰ型（Th1）向輔助性T細(xì)胞Ⅱ型（Th2）免疫偏離密切相關(guān)［4］。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1誘導(dǎo)的抗凋亡因子-1(TGF-β1-induced antiapoptotic factor-1,

8、TIAF-1)是極化的Th2細(xì)胞表達(dá)的免疫分子之一。實(shí)驗(yàn)證明，TIAF-1能抑制腫瘤壞死因子α（TNF-α）對(duì)成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，提示該分子對(duì)其他細(xì)胞的凋亡有保護(hù)作用［5］。本研究旨在通過(guò)觀察同種異體慢性排斥反應(yīng)移植腎組織中TIAF-1的表達(dá)及分布，初步探討TIAF-1在慢性排斥反應(yīng)中的作用。 </p><p><b>　　1 材料和方法 </b></p><p&g

9、t;　　1.1 標(biāo)本 取自蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院腎移植中心2000年7月—2003年5月發(fā)生慢性排斥反應(yīng)和急性排斥反應(yīng)（AR）的受體移植腎，分別為28例和16例，所有腎移植患者術(shù)后均采用常規(guī)免疫抑制治療（環(huán)孢素A+霉酚酸酯+潑尼松）。AR和CR根據(jù)臨床表現(xiàn)和移植腎病理確診，病理診斷參照Banff 診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］。6例因腎細(xì)胞癌行腎切除的未受腫瘤侵犯的正常腎組織和8例供腎正常腎組織為實(shí)驗(yàn)對(duì)照。 </p><p>

10、　　1.2 試劑 兔抗人TIAF-1多克隆抗體由Mattison教授惠贈(zèng)，兔抗人CD3多克隆抗體、鼠抗人CD68和鼠抗人CD20單克隆抗體均為美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品，SP試劑盒為美國(guó)AYMED公司產(chǎn)品。 </p><p>　　1.3 免疫組織化學(xué)檢查及結(jié)果分析 免疫組織化學(xué)染色采用SP法［7］：4 μm厚石蠟切片常規(guī)脫蠟水化，微波抗原修復(fù)。0.3% H2O2甲醇溶液浸泡30 min，正常山羊血清

11、室溫孵育20 min，兔抗人TIAF-1多克隆抗體工作濃度為1∶100，兔抗人CD3多克隆抗體、鼠抗人CD20單克隆抗體工作濃度分別為1∶50和1∶80，4℃下過(guò)夜，滴加SP復(fù)合物后置37℃下40 min，PBS液洗5 min×3次；滴加DAB-H2O2顯色劑，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，脫水，封片。PBS代替一抗、二抗作陰性對(duì)照。 </p><p>　　結(jié)果判定：細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)染成棕黃色或棕褐色為陽(yáng)性，不著色為

12、陰性。用顯微測(cè)微器在高倍鏡（10×40）視野下計(jì)數(shù)16個(gè)視野，將陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)之和乘以4即得每平方毫米間質(zhì)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。 </p><p>　　1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)以±s表示。組間比較采用t檢驗(yàn)，P&lt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 </p><p><b>　　2 結(jié) 果 </b></p><p>　　

13、2.1 移植腎組織中TIAF-1的表達(dá)分布 腎細(xì)胞癌行腎切除的未受腫瘤侵犯的正常腎組織和正常供腎組織未見(jiàn)TIAF-1表達(dá)。在急性排斥反應(yīng)移植腎組織中，TIAF-1表達(dá)有增強(qiáng)趨勢(shì)，其中間質(zhì)TIAF-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增加，腎小管上皮細(xì)胞有微弱的TIAF-1表達(dá)。在慢性排斥反應(yīng)移植腎組織中，TIAF-1在間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞中的表達(dá)呈彌漫性、強(qiáng)陽(yáng)性，較多的腎小管上皮細(xì)胞呈高度染色。在連續(xù)的移植腎組織切片中，TIAF-1陽(yáng)性浸潤(rùn)細(xì)胞彌漫性分布的區(qū)域

14、同時(shí)存在大量CD3和CD20陽(yáng)性細(xì)胞浸潤(rùn)，提示T細(xì)胞和B細(xì)胞均表達(dá)TIAF-1。 </p><p>　　2.2 移植腎間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞TIAF-1表達(dá)的比較及其與CD3、CD20和CD68陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表1。AR組移植腎組織間質(zhì)浸潤(rùn)的TIAF-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著高于對(duì)照組（P&lt;0.05），CR組移植腎組織間質(zhì)TIAF-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著高于AR組（P&lt;0.01）。對(duì)移植腎組織間質(zhì)TI

15、AF-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與CD3、CD20、CD68陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，TIAF-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與CD3和CD20陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)（P＜0.05），而與CD68陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。表1 3組腎間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞TIAF-1的表達(dá)及CD3、CD20和CD68陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的比較 </p><p><b>　　3 討 論 </b></p><p>　　T淋

16、巴細(xì)胞對(duì)同種異體抗原的識(shí)別是啟動(dòng)細(xì)胞免疫的基礎(chǔ)。目前認(rèn)為至少有2種不同的T細(xì)胞識(shí)別途徑，即直接識(shí)別和間接識(shí)別。在間接識(shí)別途徑中，CD4+T細(xì)胞的TCR能夠識(shí)別被抗原遞呈細(xì)胞（APC）加工處理并呈遞的供體MHC分子分解的同種異體抗原肽，也稱CD4+Th2反應(yīng)。研究表明，異基因識(shí)別的間接途徑的強(qiáng)化，加大了急性排斥反應(yīng)，并在慢性移植物失功中起主導(dǎo)作用，是誘發(fā)和維持慢性排斥反應(yīng)的關(guān)鍵［4］。最近發(fā)現(xiàn)，極化的Th2細(xì)胞能表達(dá)一種TGF-β1誘導(dǎo)的

17、抗凋亡細(xì)胞分子-1(TIAF-1)，TIAF-1可抑制TNF-α對(duì)成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，據(jù)此推測(cè)TIAF-1對(duì)其他細(xì)胞的凋亡有抑制作用［5］。本研究發(fā)現(xiàn)，正常供腎組織中幾乎無(wú)TIAF-1表達(dá)；AR腎組織中，TIAF-1表達(dá)有增強(qiáng)趨勢(shì)，其中以間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞染色為主，腎小管上皮細(xì)胞輕微染色。CR腎組織中，TIAF-1在間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞的表達(dá)呈彌漫性、強(qiáng)陽(yáng)性，腎小管上皮細(xì)胞亦呈重度染色，腎小球及血管內(nèi)皮細(xì)胞幾乎不染色。連續(xù)移植腎病理切片免疫組化染

18、色顯示，在TIAF-1顯著染色的區(qū)域可見(jiàn)大量CD3陽(yáng)性細(xì)胞和CD20陽(yáng)性細(xì)胞存在；此外，CR腎組織間質(zhì)中TIAF-1</p><p>　　研究表明，細(xì)胞凋亡在急、慢性排斥反應(yīng)發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用，同種異體腎移植慢性排斥反應(yīng)與移植腎腎小管上皮細(xì)胞凋亡密切相關(guān)［2，8］。而在移植腎組織中，細(xì)胞凋亡并不僅僅局限于實(shí)質(zhì)細(xì)胞，間質(zhì)浸潤(rùn)的T淋巴細(xì)胞亦存在凋亡現(xiàn)象。研究表明，移植腎間質(zhì)浸潤(rùn)T淋巴細(xì)胞的凋亡將下調(diào)受體對(duì)移植

19、腎的免疫排斥反應(yīng)，預(yù)示急性排斥反應(yīng)的結(jié)局［3，9］。本研究結(jié)果表明，慢性排斥反應(yīng)移植腎浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞均強(qiáng)烈表達(dá)TIAF-1，提示這種抗凋亡因子的表達(dá)可能對(duì)移植腎產(chǎn)生正負(fù)兩方面的影響。TIAF-1在移植腎腎小管上皮細(xì)胞上的表達(dá)可能反映了一種保護(hù)性機(jī)制的誘導(dǎo)，使得腎小管上皮細(xì)胞避免凋亡。慢性排斥反應(yīng)移植腎間質(zhì)浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的TIAF-1高表達(dá)可能反映了Th1向Th2的免疫偏離。研究表明，自身免疫性甲狀腺炎浸潤(rùn)Th2淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的

20、細(xì)胞因子IL-4、IL-10可誘導(dǎo)甲狀腺腺上皮細(xì)胞表達(dá)抗凋亡因子c-Flip和 BCL-XL，以上2種抗細(xì)胞凋亡因子能阻止自身免疫反應(yīng)引起的實(shí)質(zhì)性細(xì)胞的破壞［10-11］。至于移植腎間質(zhì)浸潤(rùn)Th2淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子能否誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)TIAF-1及其他抗凋亡因子，尚待進(jìn)一</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】 </b></p><p>　?。?］ Zav

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