干用辣椒種質(zhì)資源親緣關(guān)系的RAPD分析.pdf

1、利用RAPD技術(shù)對來自不同生態(tài)環(huán)境的40份干用辣椒種質(zhì)資源進行多態(tài)性分析和聚類比較，在DNA水平上研究干用辣椒種質(zhì)資源的親緣關(guān)系，為干用辣椒雜種優(yōu)勢育種的親本選配提供理論依據(jù)。取得的主要研究結(jié)果如下： 1.采用改良的CTAB法從干用辣椒葉片中提取DNA，經(jīng)紫外分光光度計和瓊脂糖凝膠電泳檢測，OD260/OD280比值在1.72-2.0之間，DNA濃度介于190-890ng·μl；結(jié)果表明CTAB法提取的DNA條帶完整，無降解，可

2、以用于RAPD分析。 2.試驗對反應(yīng)體系中5個重要因子進行了正交試驗，篩選出最優(yōu)的反應(yīng)體系，并在此基礎(chǔ)上對退火溫度與循環(huán)次數(shù)進行單因素試驗，從而確定了一套最佳的干用辣椒RAPD反應(yīng)體系和擴增程序，即反應(yīng)體系(25μl)為：PCR染料2.0μl，MgCl22.0mmoI·L-1，dNTPs0.6 mmol·L-1，引物0.5μmol·L-1，DNA模板125ng，Taq酶1.25U，超純水14.9μl:擴增程序為：94℃預(yù)變性4

3、min，40個PCR循環(huán)94℃變性1 min，37℃退火1 min，72℃延伸1 min，72℃復(fù)延伸5 min，4℃保存。 3.從200條隨機引物中選擇了擴增效果最好的11個引物進行聚類分析，擴增出了115條DNA條帶，平均每個引物10.4條，其中101條條帶具有多態(tài)性，多態(tài)性比率高達87.8％，每個引物可擴增出7-11條多態(tài)性帶，平均每個引物9.18條多態(tài)性帶。 4.根據(jù)Jaccard公式建立了遺傳距離矩陣圖與親緣關(guān)

4、系樹狀圖：對40個干用辣椒種質(zhì)資源進行遺傳關(guān)系比較和類別劃分：當(dāng)遺傳距離為0.46處可以分為八類：第一類：干紅8號：第二類：火箭；第三類：DLXHT-1號、9801大王代替品種；第四類：K-503；第五類：金富貴、紅日、谷雨P(guān)E-700-x、谷雨神州行、京椒2、谷雨P(guān)E-706、谷雨P(guān)E-707、京椒1、谷雨P(guān)E-705、谷雨P(guān)E-704、K-500、紅峰、美國鐵皮椒、一品紅、谷雨P(guān)E-703、谷雨P(guān)E-702、紅塔、谷雨P(guān)E-701、