木瓜屬種質(zhì)資源的RAPD、AFLP親緣關(guān)系鑒定及遺傳多樣性分析.pdf

1、木瓜屬(Chaenomeles)起源于我國,具有豐富的資源和品種類型和良好的應(yīng)用前景。目前,關(guān)于木瓜屬種質(zhì)資源遺傳多樣性及親緣關(guān)系的研究還未見報道。 本研究利用RAPD(Random amplified polymorphic DNA,隨機擴增的多態(tài)性DNA)標記技術(shù),對我國木瓜屬12個品種,即‘猩紅與金黃,C.×superba‘Crimson and Gold’、‘長壽樂’C.×superba‘Changshoule’、‘綠寶

2、石’C.×superba‘Lu Baoshi’、‘多彩’C. speciosa‘Toyo Nishiki’、‘紅星’C.speciosa‘Hongxing’、‘大富貴’C.×superba‘Da Fugui’、‘紅寶石,C.×superba‘Hong Baoshi’、‘復(fù)長壽’C.×superba‘Fu Changshou’、‘單白’C.japonica‘Danbai’、‘碧雪’C.×superba‘Bixue’、‘羅扶’C. cath

3、ayensis‘Luofu’、‘長俊’C. cathayensis‘Changjun’進行基因組多態(tài)性分析,篩選了5個隨機引物；利用AFLP(Amplified fragment length polymorphism擴增片段長度多態(tài)性)標記技術(shù)我國木瓜屬(Chaenomeles)的29個品種即‘猩紅與金黃’C.×superba‘Crimson and Gold’、‘長壽樂’C×superba‘Changshoule’、‘報春’C. s

4、peciosa‘Baochun’、‘綠寶石’C.×superba ‘LaBaoshi’、‘多彩’C. speciosa‘Toyo Nislfild’、‘紫衣’C.×superba‘ziyi’、‘鳳凰木’C. speciosa‘Fenhuang Mu’、‘紅星’C speciosa‘Hongxing’、‘大富貴’C.×superba‘Da Fugui’、‘紅寶石’C.×superba‘Hong Baoshi’、‘復(fù)長壽’C.×superb

5、a‘Fu Changshou’、‘單白’C.japonica‘Danbai’、‘碧雪’C.×superba‘Bixue’、‘單粉’Cjaponica‘Dan Fen’、‘日落’C.japonica‘Riluo’、‘紅霞’C.cathayensis‘Hongxia’、‘醉楊妃’C. cathayensis‘Zui Yangfei’,‘羅扶’C.cathayensis‘Luofu’、‘長俊’C. cathayensis‘Changiun’、

6、‘一品香’C.cathayensis‘Yipin Xiang’、‘夕照’C. speciosa‘Xizhao’、‘沂紅’C.×superba‘Yi Hong’、‘矮紅’C.japonica‘Pygmaeus’、‘粉蝶’C.×superba‘Fendie’、‘紅舞’C.×superba‘Hongwu’、‘日本紅’C. japonica‘Rubra’、‘沂橙’C.×superba‘Yi Cheng’、‘驕陽’C.×superba‘Jiaoy

7、ang’、‘四季紅’C. japonica‘Siji Hong’進行基因組多態(tài)性分析,從64對引物中篩選了8對隨機引物。在NTSYS程序中,統(tǒng)計這些擴增產(chǎn)物用來計算遺傳相似系數(shù)和遺傳距離,建立UMPGA(不加權(quán)算術(shù)平均法)聚類分析圖。從分子水平上研究木瓜屬中部分種及品種的親緣關(guān)系和遺傳多樣性。主要結(jié)論如下： (1) 通過對常規(guī)CTAB法和改良CTAB法兩種DNA提取方法對木瓜屬品種幼葉的提取效果進行比較研究,確定改良CTAB法較

8、為適合木瓜屬品種幼葉基因組DNA的提取,所提的DNA適宜RAPD和AFLP分析。 (2) 用RAPD-PCR技術(shù)對12木瓜屬品種進行基因組DNA多態(tài)性分析,5個隨機引物擴增出313個DNA片段,其中288條譜帶表現(xiàn)多態(tài)性,多態(tài)性檢測率為92.01％,表明受試木瓜屬品種之間富含遺傳多態(tài)性帶。將擴增圖譜利用UPGMA方法構(gòu)建遺傳聚類樹狀圖,分析品種間遺傳關(guān)系。相似系數(shù)0.655將12個木瓜屬品種劃分為4個品種群,不同相似系數(shù)的聚類群

9、劃分與花色之間并非完全未有相關(guān)性。來源相同花色一致的木瓜屬品種之間親緣關(guān)系相對較近,但種源來源對木瓜屬品種的親緣關(guān)系的影響比花色更為突出。 (3) 采用AFLP標記技術(shù)對29個木瓜屬品種進行研究。8對AFLP引物組合(E-AAG+M-CAA、E-ACA+M-CAA、E-AAG+M-CAC、E-AAG+M-CAG、E-AAG+M-CAT、E-AAG+M-CTG、E-ACA+M-CTT和E-ACG+M-CTT)總計獲得1095個位點

10、,其中多態(tài)性位點1035個,平均多態(tài)率為94.52％。引物組合E-AAG/M-CAT的擴增帶數(shù)、多態(tài)性帶數(shù)目、多態(tài)性比率和標記指數(shù)都較高。8對引物組合可以成功地鑒定29個品種,與RAPD結(jié)果基本吻合。聚類結(jié)果表明,29份供試材料在相似系數(shù)為0.61處可劃分為四個品種群：貼梗海棠品種群,木瓜海棠品種群、日本海棠品種群和傲大品種群。四個種內(nèi)各個品種均聚在一起,然后木瓜海棠品種群單獨聚在一起,另外其他三個品種群聚在一起,表明同一種的品種間基因

11、型相似系數(shù)較高,而木瓜海棠與其它三個品種群的親緣關(guān)系較遠。接著日本海棠與其它兩個品種群分開,表明日本海棠與另兩個品種群親緣關(guān)系較遠,而另外兩個品種群即貼梗海棠品種群與傲大品種群親緣關(guān)系最近。 (4) 比較了RAPD和AFLP標記對主要木瓜屬樣品遺傳多樣性的研究結(jié)果,AFLP標記是檢測遺傳多樣性能力較優(yōu)、獲得多態(tài)性效率較高的分子標記。本實驗的研究結(jié)果表明,RAPD和AFLP技術(shù)運用到木瓜屬品種的分類上是可靠的,但并不排斥其它分類方