柑桔抗?jié)儾》肿訕?biāo)記篩選.pdf

1、柑桔潰瘍病(Citrus Canker)是嚴(yán)重危害世界柑桔產(chǎn)業(yè)的一種細(xì)菌性病害，病原為地毯草黃單胞桿菌柑桔致病變種[Xanthomonas axonopodis pv．Citri(Xac)]。該病能感染大多數(shù)栽培柑桔品種，導(dǎo)致落葉、落果、樹勢(shì)衰弱、果實(shí)生銹斑和品質(zhì)變劣，甚至樹體死亡。增加了生產(chǎn)成本、降低了商品價(jià)值。培育和利用抗?jié)儾〉母探燮贩N，是從根本上解決潰瘍病危害的有效而徹底的方法，但受到抗性機(jī)理研究不夠深入、常規(guī)育種轉(zhuǎn)移抗性基因面

2、臨多重困難，以及可利用外源抗性基因有限等因素的制約，目前柑桔抗?jié)儾∑贩N的培育，尤其是生產(chǎn)上大量栽培的甜橙、葡萄柚等敏感品種的改良仍進(jìn)展甚微，迫切需要對(duì)潰瘍病抗性進(jìn)行深入研究。分子標(biāo)記技術(shù)為深入開展柑桔潰瘍病研究提供了一條途徑。 本試驗(yàn)采用抗柑桔潰瘍病的宜昌橙2586×易感病的嶺南沙田柚F1代為試材，開展抗?jié)儾》肿訕?biāo)記篩選。首先，隨機(jī)選取80株F1代材料，在疫區(qū)進(jìn)行潰瘍病田間接種鑒定，按標(biāo)準(zhǔn)5級(jí)抗性評(píng)價(jià)程序分級(jí)評(píng)價(jià)；其次，為了

3、與分子標(biāo)記評(píng)價(jià)結(jié)果進(jìn)行對(duì)照分析，將免疫和高抗類型作為抗性類型，中抗、中感和感病作為敏感類型進(jìn)行簡化分析，并對(duì)該簡化分離結(jié)果進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。隨后，根據(jù)集合分離分析法BSA(Bulked Segregant Analysis)，分別選取8個(gè)極端抗病單株和極端感病單株組建抗感基因池，通過SSR和SRAP等分子標(biāo)記技術(shù)，建立適合柑桔的分子標(biāo)記體系，開展與該病抗性相關(guān)的分子標(biāo)記篩選。對(duì)基因池篩選獲得的差異引物組合，進(jìn)行親本和抗感池個(gè)體的進(jìn)一步鑒定，

4、鑒定的標(biāo)記作為可能的抗性候選標(biāo)記，并將該候選標(biāo)記對(duì)鑒定的分離群體進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，將其結(jié)果與抗性鑒定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析，采用最大似然法計(jì)算遺傳距離。最后，為了更深入驗(yàn)證所獲得的標(biāo)記，選用生產(chǎn)上比較公認(rèn)的潰瘍病抗感性類型材料，進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。通過上述研究，獲得以下主要研究結(jié)果： (1)田間抗性鑒定表明，宜昌橙2586×嶺南沙田柚的F1代材料抗性分離明顯，80株材料除2株死亡外。免疫(I)5株，高抗(HR)37株，中抗(MR)31株，中感

5、(MS)3株和高感(S)2株。簡化為抗感2級(jí)分析，有42株抗病，36株感病。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，X2=0.16遠(yuǎn)小于X20.05=3.84，抗感性狀分離符合1：1比例，表明此條件下該性狀的遺傳符合孟德爾規(guī)律。 (2)建立比較穩(wěn)定且適于BSA法標(biāo)記篩選的柑桔SSR和SRAP擴(kuò)增檢測(cè)體系，從285對(duì)SSR引物組合中篩選到26對(duì)在抗感基因池間表現(xiàn)多態(tài)性的引物，從360對(duì)SRAP引物組合中篩選到67對(duì)在抗感基因池間表現(xiàn)出多態(tài)性引物。 (

6、3)通過基因池個(gè)體驗(yàn)證，從26對(duì)SSR多態(tài)性引物組合中找到了一個(gè)可能與柑桔潰瘍病抗性相關(guān)基因連鎖的標(biāo)記，將其命名為CR14-110。該標(biāo)記在8個(gè)抗病基因池單株和8個(gè)感病基因池單株及親本間表現(xiàn)與抗性相關(guān)的多態(tài)性。進(jìn)一步對(duì)測(cè)試分離群體進(jìn)行單株驗(yàn)證，表現(xiàn)抗病的42個(gè)單株中，有3株未出現(xiàn)該特征片段：表現(xiàn)感病的36個(gè)單株中，有6株出現(xiàn)該特征片段。經(jīng)CORREL函數(shù)相關(guān)分析，該標(biāo)記與柑桔潰瘍病抗性的相關(guān)系數(shù)為0.79，采用最大似然法計(jì)算重組率為(9