獼猴桃抗?jié)儾』虻纳镄畔W(xué)分析.pdf

1、獼猴桃病害嚴(yán)重影響了獼猴桃的品質(zhì)與產(chǎn)量，其中由丁香假單胞桿菌獼猴桃致病變種P.Syringae pv.actinidae(PSA)引起的獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病是最重要的病害之一。本研究從獼猴桃的抗病基因入手，分析植物抗病基因的序列結(jié)構(gòu)與其功能的關(guān)系，找到能輔助獼猴桃抗?jié)儾≈仓攴肿佑N的標(biāo)記，結(jié)果如下:
　　1.以核苷酸結(jié)合位點(diǎn)(Nucleotide binding site，NBS)類基因保守序列，對‘紅陽’獼猴桃全基因組中所有96

2、條NBS-LRR類基因，利用Kiwifruit Genome Database、Pfam和Coils Server網(wǎng)站，和Bioedit、MEGA5.0、ClustalW軟件，分析確定‘紅陽’獼猴桃的NBS-LRR基因類型、結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)關(guān)系。在‘紅陽’獼猴桃全基因組中共有96個(gè)NBS-LRR類基因，其中27條NBS-LRR類基因分布在基因簇內(nèi)，可根據(jù)其結(jié)構(gòu)進(jìn)一步劃分為20類基因。并對NBS-LRR類基因家族進(jìn)行了氨基酸多序列比對和系

3、統(tǒng)進(jìn)化樹分析，發(fā)現(xiàn)整個(gè)NBS-LRR基因家族可分為三個(gè)亞家族。相對其它物種，紅陽獼猴桃NBS-LRR類基因總數(shù)少，缺少TIR結(jié)構(gòu)，具有LRR結(jié)構(gòu)的基因所占比重低，NBS結(jié)構(gòu)不完整，這些特點(diǎn)可能與其感病性有關(guān)聯(lián)。
　　2.以易感獼猴桃潰瘍病品種‘紅陽’獼猴桃全基因組中所有數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，尋找到有可能存在獼猴桃抗?jié)儾』虻膬蓚€(gè)抗病基因家族Pto-like基因家族和NBS-LRR基因家族的基因序列，并基于該序列設(shè)計(jì)引物，以潰瘍病抗病品種‘

4、徐香’獼猴桃的全基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，克隆并測序最終得到41條能夠通讀的不重復(fù)序列序列，分析其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)并與‘紅陽’獼猴桃的NBS-LRR基因序列結(jié)構(gòu)進(jìn)行對比分析，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)品種的NBS-LRR基因中幾乎都沒有Tir結(jié)構(gòu)域，且NBS結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)特點(diǎn)有一定差異:在構(gòu)成NBS結(jié)構(gòu)的8個(gè)結(jié)構(gòu)域中，相比‘紅陽’獼猴桃，‘徐香’獼猴桃的NBS-LRR序列都具有更完整的Kinase2結(jié)構(gòu)域，但是缺失RNBS-D結(jié)構(gòu)和MHDVmotif結(jié)構(gòu)比較

5、嚴(yán)重;總體上來說，‘徐香’獼猴桃的NBS結(jié)構(gòu)域更為完整。
　　3.在‘紅陽’獼猴桃全基因組序列中國搜集整理得到NBS家族（共96條）和RLK家族（共261條）兩大抗病基因家族的序列，應(yīng)用利用GRAMENE網(wǎng)站在線工具分析其結(jié)構(gòu)，找到68對SSR位點(diǎn)，以此設(shè)計(jì)和篩選出最終產(chǎn)物在110-340bp，引物長度為18-22bp的引物，以17個(gè)品種獼猴桃全基因組DNA為模板擴(kuò)增，最終篩選得到的兩對引物基本能夠在17個(gè)獼猴桃品種中表現(xiàn)出良好的