轉(zhuǎn)ω-3脂肪酸去飽和酶基因(sFat-1)的體細(xì)胞克隆豬制備過程中胚胎移植及脂肪酸檢測.pdf

1、多不飽和脂肪酸（PUFAs）是一類被廣泛研究和關(guān)注的脂肪酸。PUFAs主要包括ω-6和ω-3 PUFAs兩種類型，ω-6PUFAs對人體意義不大，其過量的攝入反而會危害人體健康。而ω-3PUFAs對人體卻具有積極的意義，已被證實在預(yù)防和治療心血管疾病、關(guān)節(jié)炎、癌癥等多種疾病方面發(fā)揮著重要作用。但自然界中ω-6PUFAs含量豐富而ω-3PUFAs含量極少，導(dǎo)致人體中ω-6PUFAs攝入過多而ω-3PUFAs攝入嚴(yán)重不足，使人體中ω-6/ω

2、-3之比高達(dá)16以上。因此，如何使人體增加ω-3PUFAs的攝入量就成了合理利用脂肪酸的關(guān)鍵，也是當(dāng)今世界人們所關(guān)心的一個問題。 體細(xì)胞核移植技術(shù)與基因轉(zhuǎn)移技術(shù)相結(jié)合為生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因家畜開辟了一條有效途徑，為體外生產(chǎn)更多的ω-3PUFAs提供了新的契機(jī)。本研究旨在提高轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆豬的生產(chǎn)效率，研究了體細(xì)胞克隆豬胚胎移植過程中的最佳運(yùn)輸溫度、時間及胚胎移植的最佳時機(jī)，同時對富含ω-3脂肪酸去飽和酶基因克隆豬的微衛(wèi)星及脂肪酸進(jìn)行了檢

3、測。 為提高轉(zhuǎn)基因克隆豬效率，研究了不同運(yùn)輸溫度與時間對豬孤雌胚胎發(fā)育的影響，以確立豬克隆胚胎的最佳運(yùn)輸溫度與時間。試驗包括：（1）不同溫度（37℃、38℃、39℃）對孤雌胚胎的卵裂率、囊胚率的影響；（2）不同時間（2 h、3h、4 h）對孤雌胚胎的卵裂率、囊胚率的影響。實驗結(jié)果：（1）培養(yǎng)3h后，在39℃運(yùn)輸時，孤雌胚胎的卵裂率（90.0±4.3%）和囊胚率（33.8±7.4%），與37℃、38℃的卵裂率（72.6±6.9%、

4、80.6±5.5%）和囊胚率（18.9±1.5%、26.0±2.2%）相比，差異顯著（P<0.05）；（2）培養(yǎng)3h后，孤雌胚胎的卵裂率（81.6±6.1%）和囊胚率（31.2±3.6%），與培養(yǎng)2h、4h的卵裂率（64.9±9.6%、49.2±2.4%）和囊胚率（18.2±6.7%、19.7±2.9%）相比，差異顯著（P<0.05）。 為提高豬體細(xì)胞克隆胚胎移植效率，比較了供受體同期化方案對豬體細(xì)胞克隆胚胎輸卵管內(nèi)移植后30d

5、妊娠率和妊娠足月率的影響。將體外培養(yǎng)2d的豬體細(xì)胞克隆胚胎，移植到發(fā)情第1～2 d的受體母豬。根據(jù)受體母豬卵泡發(fā)育與排卵狀況將受體豬群分為2個類別：卵泡發(fā)育處于即將排卵或正在排卵階段（組一）；卵泡發(fā)育處于排卵前階段或完全排卵階段（組二）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：（1）組一6頭受體母豬胚胎移植后30 d受胎率為100%；而組二10頭受體母豬受胎率為40%，二者差異顯著（P<0.05）。（2）組一6頭受體母豬全部產(chǎn)仔，妊娠足月率為100%；組二10頭受胎

6、母豬2頭產(chǎn)仔，妊娠足月率為20%，二者差異顯著（P<0.05）。 本研究首次通過體細(xì)胞核移植生產(chǎn)了轉(zhuǎn)線蟲ω-3脂肪酸去飽和酶基因sFat-1豬。出生的21只仔豬，存活15頭，經(jīng)微衛(wèi)星、PCR和Southern blot鑒定，最終獲得13只轉(zhuǎn)基因豬。在轉(zhuǎn)基因豬肌肉組織中DHA平均含量高達(dá)0.968%，ω-3PUFAs總含量平均高達(dá)7.523%。這表明本研究sFat-1基因能夠在轉(zhuǎn)基因大型家畜中產(chǎn)生更多、更長鏈的、且更有價值的DHA