中國荷斯坦奶牛hsp70基因和chip基因多態(tài)性對熱應(yīng)激影響研究.pdf

1、奶牛熱應(yīng)激一直影響著奶牛業(yè)的發(fā)展.給奶牛業(yè)造成嚴重損失。HSP70作為分子伴侶在正常和應(yīng)激條件下對機體的生理機能發(fā)揮重要作用，CHIP具有E3泛素鏈接酶活性，與分子伴侶HSP70相互作用在泛素蛋白酶降解系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。本試驗選擇了中國荷斯坦牛為試驗材料，以hsp70基因和chip基因作為功能候選基因進行研究，通過單核苷酸多態(tài)性和統(tǒng)計模型分析，以期為中國荷斯坦牛育種提供分子標記輔助選擇的依據(jù)。試驗采集427頭系譜資料齊全、生產(chǎn)記錄完整

2、的中國荷斯坦牛血樣，并采集兩頭身體健康的荷斯坦奶牛的組織，包括心臟，肌肉，肝臟，脾臟和腎臟。利用PCR-SSCP，PCR-RFLP，CRS-RFLP技術(shù)對HSP70基因和CHIP基因的多態(tài)性進行研究，利用FQ-PCR技術(shù)檢測chip和hsp70基因在不同組織中的mRNA表達水平。
　　 對hsp70基因外顯子部分序列進行擴增，測序結(jié)果表明:在1524位點發(fā)現(xiàn)G/A突變，但未導致所編碼的氨基酸序列發(fā)生改變。PCR-RELP結(jié)果發(fā)現(xiàn)

3、AA，AB兩種基因型，A等位基因占主要優(yōu)勢，屬于低度多態(tài)，不是理想的分子標記。群體遺傳學分析表明，該位點達到Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P＞0.05）。擴增chip全基因序列，在719位點第一內(nèi)含子上發(fā)現(xiàn)C/T突變，在1014位點第二內(nèi)含子上發(fā)現(xiàn)T缺失，1407位點第四外顯子上發(fā)現(xiàn)T插入并引起所編碼的氨基酸179位置移碼突變。1014位點T缺失無酶切位點進行檢測。PCR-RELP，CRS-RFLP結(jié)果發(fā)現(xiàn)719，1407兩個位

4、點均存在三種基因型，A、B兩種等位基因所占比例均近似相同。群體遺傳學分析表明這兩個位點未達到Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P＜0.05），在所研究的群體中，處于中度多態(tài)。FQ-PCR結(jié)果表明，hsp70基因mRNA在肝臟中表達最高，chip基因mRNA在心臟中表達最高，三個位點中只有chip基因1407位點在兩頭牛中存在不同基因型，分別是AB、BB型，其中BB型個體CHIP表達量高于AB基因型個體。
　　 利用SAS8.

5、0軟件，對hsp70和chip基因的3個多態(tài)位點的基因型與直腸溫度和紅細胞鉀濃度進行相關(guān)分析。結(jié)果表明:hsp70基因1524位點AA型個體紅細胞濃度顯著高于AB型個體，但該位點屬于低度多態(tài)所以有待于擴大樣品量進行證實;chip基因719位點不同基因型對直腸溫度和紅細胞鉀濃度沒有顯著差異，1407位點不同基因型的直腸溫度沒顯著差異，而對紅細胞鉀濃度BB基因型顯著低于AA和AB兩個基因型。通過以上結(jié)果說明chip基因1407位點BB基因型