AC2衛(wèi)星DNA在家豬13-17羅伯遜易位研究中的應(yīng)用.pdf

1、羅伯遜易位包含羅伯遜融合和羅伯遜斷裂兩個(gè)內(nèi)容，融合和斷裂的位置都位于著絲粒處，著絲粒主要有動(dòng)粒和著絲粒DNA兩個(gè)構(gòu)架，其中著絲粒DNA對維持染色體的空間結(jié)構(gòu)、黏附姐妹染色單體、組裝著絲點(diǎn)、遺傳重組等都具有重要作用。豬著絲粒DNA重復(fù)序列分為兩個(gè)家族，即MC1和AC2。MC1是由340bp的重復(fù)單體串聯(lián)組成，分布于豬的中或亞中著絲粒染色體(1-12)和X染色體上，而AC2主要是由14bp單體構(gòu)成的重復(fù)序列組成，位于所有的端著絲粒染色體(1

2、3-18)上。
　　 根據(jù)已報(bào)道的家豬著絲粒衛(wèi)星DNA序列設(shè)計(jì)引物，對正常家豬基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到家豬著絲粒區(qū)域的AC2衛(wèi)星DNA序列，采用凝膠回收試劑盒將800bp、500bp、250bp的序列進(jìn)行切膠回收，回收片段經(jīng)純化后連接到pGEM-Teasy載體，分別挑取3種回收片段的陽性克隆進(jìn)行序列測定，序列測定后，以AC2序列的克隆質(zhì)粒作為探針前體，采用PCR法將Dig-dUTP隨機(jī)插入DNA中，而使DNA被標(biāo)記，隨后

3、利用熒光原位雜交的的方法，對擴(kuò)增片段進(jìn)行家豬中期染色體定位并對13/17易位染色體進(jìn)行檢測，結(jié)果如下:
　　 1、AC2序列分析結(jié)果表明800bp左右克隆的長度為857bp;500bp左右的克隆兩個(gè)506bp和552bp;250bp左右克隆的長度為263bp。使用NCBI的BLAST工具，進(jìn)行比對分析，分析結(jié)果表明:857bp前半部分222bp的片段與NCBI序列同源性高達(dá)94％，后半部分NCBI沒有報(bào)道。同時(shí)857bp與263

4、bp序列同源性為86％，與506bp和552bp序列的同源性為72.32％，說明可能857bp的片段，由263bp的片段和506bp或552bp共同進(jìn)化而來。一般認(rèn)為不同的熏復(fù)單體在基因組進(jìn)化過程中起源于同一個(gè)祖先片段，通過一個(gè)或者多個(gè)短的原始片段經(jīng)過復(fù)制或不均等交換、堿基取代和進(jìn)一步復(fù)制和缺失產(chǎn)生。
　　 2、FISH檢測結(jié)果顯示雜交信號位于家豬端染色體著絲粒區(qū)域，但雜交信號在端染色體著絲粒區(qū)域強(qiáng)度并不一致，說明不同染色體AC