13-17羅伯遜易位豬染色體瑞粒的研究.pdf

1、端粒是存在于線狀染色體末端的DNA重復序列，它是線狀染色體末端的一種特殊結構，由富含GC堿基的DNA簡單重復序列及端粒結合蛋白共同構成。端粒具有維持染色體末端結構穩(wěn)定，防止染色體間末端連接，并且可補償滯后鏈5'末端在消除RNA引物后所造成的空缺的生物學功能。端粒DNA在染色體上的組成及變化一直都是生物研究的一個重要方面，對13/17羅伯遜易位染色體端粒的研究可以為研究羅伯遜易位的相關遺傳機理提供研究資料。
　　 本研究采用Hae

2、Ⅲ和HinfI內(nèi)切酶對提取的豬組織基因組DNA樣進行雙酶切，將酶切產(chǎn)物進行回收連接，根據(jù)已知的端粒簡單重復序列(TTAGGG)n，通過Primer5.0設計出三條引物，以連接產(chǎn)物為模板進行兩次PCR，純化回收PCR產(chǎn)物，將其連接到pMD18-T載體上，挑取陽性克隆進行測序。將得到的端粒簡單重復序列作為探針，采用地高辛隨機引物標記法標記探針，對13/17羅伯遜易位豬的染色體標本片進行熒光原位雜交，以檢測羅伯遜易位染色體新著絲粒區(qū)域是否存在

3、端粒簡單重復序列。陽性克隆子的測序結果顯示，95～341bp為端粒簡單重復序列，因此采用此246bp序列作為熒光原位雜交的探針。熒光原位雜交的檢測結果顯示，在染色體的兩端顯示雜交信號，但在13/17羅伯遜易位染色體著絲粒區(qū)域不顯示雜交信號，說明在13/17羅伯遜易位染色體著絲粒部位發(fā)生了端粒序列的缺失。
　　 定位出13/17羅伯遜易位新染色體融合部位發(fā)生了端粒序列的缺失，可為進一步研究端粒序列的缺失對13/17羅伯遜易位豬的生