牡丹試管苗生根培養(yǎng)初步研究.pdf

1、本文以不同牡丹品種(‘烏龍捧盛’、‘胡紅’、‘洛陽(yáng)紅’)的鱗芽作為外植體，研究激素配比和品種差異對(duì)鱗芽誘導(dǎo)過(guò)程萌發(fā)率，玻璃化率和污染率的影響以及繼代培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)增值系數(shù)和褐化率的影響；以牡丹品種‘烏龍捧盛’無(wú)根試管苗為材料進(jìn)行生根的誘導(dǎo)，研究不同培養(yǎng)條件和激素配比對(duì)生根率，平均根數(shù)和平均根長(zhǎng)的影響；同時(shí)測(cè)定生根培養(yǎng)過(guò)程中可溶性總糖，淀粉，游離氨基酸，可溶性蛋白質(zhì)，總酚含量，核酸及葉綠素含量的變化及試管苗的根系活力；對(duì)生根試管苗進(jìn)行馴化移

2、栽，最后對(duì)試管苗根進(jìn)行石蠟切片，從解剖學(xué)角度探討牡丹試管苗生根難的原因。實(shí)驗(yàn)主要結(jié)果如下： 1.鱗芽萌發(fā)最佳激素配比為：NAAx6-BA為0.3x0.5mg·L-1，品種間的差異表現(xiàn)為：‘烏龍捧盛’>‘洛陽(yáng)紅’>‘胡紅’。不同濃度6-BA對(duì)試管苗玻璃化的影響顯著，隨著6-BA濃度的增加玻璃化率逐漸升高，不同濃度NAA對(duì)玻璃化率沒(méi)有顯著影響，當(dāng)NAAx6-BA為0.1×1.0mg·L-1時(shí)玻璃化率最高達(dá)14.69％；當(dāng)NAAx6-

3、BA為0.3x0.5mg·L-1時(shí)玻璃化率最低僅為4.05％；品種之間的差異表現(xiàn)為，‘洛陽(yáng)紅’發(fā)生玻璃化的頻率最高，其次是‘胡紅’，‘烏龍捧盛’發(fā)生玻璃化的頻率最低，三個(gè)品種之間表現(xiàn)出顯著差異。 2.繼代培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為‘MS+NAA1.0mg·L-1+6-BA2.0mg·L-1’，不同濃度6-BA對(duì)增殖系數(shù)的影響表現(xiàn)差異顯著，當(dāng)6-BA為2 mg·L-1時(shí)的增值系數(shù)最大：品種差異對(duì)增殖系數(shù)的影響表現(xiàn)為：‘洛陽(yáng)紅’>‘烏龍捧盛’

4、>‘胡紅’，三者之間差異表現(xiàn)顯著。繼代培養(yǎng)過(guò)程中不同濃度6-BA對(duì)褐化率的影響表現(xiàn)差異顯著，褐化率隨6-BA濃度的增高而增高，當(dāng)6-BA濃度為3mg·L-1時(shí)褐化率最高，而當(dāng)6-BA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)褐化率最低。不同品種之間對(duì)褐化率的影響表現(xiàn)為：‘洛陽(yáng)紅’>‘胡紅’>‘烏龍捧盛’，品種之間表現(xiàn)差異顯著。 3.基本培養(yǎng)基對(duì)牡丹品種‘烏龍捧盛’試管苗生根培養(yǎng)的影響表現(xiàn)為：1/2WPM優(yōu)于1/2MS+Ca2+。最佳生根培養(yǎng)基

5、為‘1/2WPM+NAA3.0mg·L-1+PVP1.0g·L-1+Gellan Gum 2.0g·L-1’培養(yǎng)條件為低溫暗培養(yǎng)，生根率最高可達(dá)到60.67％，而常規(guī)培養(yǎng)的生根率最高僅為26.67％。隨著NAA濃度的增大平均根數(shù)不斷增加；常規(guī)培養(yǎng)條件下對(duì)平均根數(shù)的影響表現(xiàn)為ABA大于NAA，低溫暗處理培養(yǎng)下相反，NAA對(duì)平均根數(shù)的影響大于ABA對(duì)平均根數(shù)的影響，NAAxABA最佳配比為3.0x0.1mg·L-1時(shí)平均生根數(shù)最多。不同濃度

6、NAA對(duì)平均根長(zhǎng)的影響差異表現(xiàn)不顯著，ABA對(duì)平均根長(zhǎng)沒(méi)有促進(jìn)作用，當(dāng)NAA為3.0 mg·L-1ABA濃度為0時(shí)平均根長(zhǎng)最長(zhǎng)，培養(yǎng)條件對(duì)平均根長(zhǎng)的影響表現(xiàn)為：常規(guī)培養(yǎng)優(yōu)于低溫暗培養(yǎng)，在常規(guī)培養(yǎng)下最長(zhǎng)根可達(dá)15cm，二者差異表現(xiàn)顯著。 4.試管苗生根過(guò)程伴隨著復(fù)雜的生理生化變化。在不定根原基的誘導(dǎo)期的可溶性糖含量、核酸、總酚含量、游離氨基酸含量和葉綠素含量的顯著增加，而可溶性蛋白質(zhì)含量和淀粉含量顯著下降，這可能由于不定根誘導(dǎo)過(guò)程

7、中促進(jìn)了不定根原基細(xì)胞的大量分裂，使DNA快速?gòu)?fù)制，總核酸及各種氨基酸含量增加，并消耗大量的蛋白質(zhì)，而使試管苗中可溶性蛋白質(zhì)含量下降，部分蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化成游離氨基酸，淀粉的減少用于降解產(chǎn)生可溶性糖為不定根的產(chǎn)生提供能量，在不定根的形成期可溶性糖被運(yùn)輸?shù)皆嚬苊缁?，保證了不定根形成所需要的大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，致使可溶性糖含量又顯著下降。 5.生根苗的移栽馴化結(jié)果表明，采用草炭珍珠巖蛭石三種基質(zhì)混合，移栽20株苗中僅成活5株，移栽成活率低。