玉簪組織培養(yǎng)及試管苗內(nèi)生菌污染控制研究.pdf

1、試驗以玉簪“法蘭西”品種的頂芽作為材料，研究在不同種類、不同濃度比例、不同培養(yǎng)條件下外源激素及栽培基質(zhì)對玉簪不定芽的初代誘導、繼代增殖、壯苗生根和煉苗移栽的影響，篩選出各階段的最適宜配方。同時對玉簪的內(nèi)生菌污染現(xiàn)象進行研究分析，通過對內(nèi)生菌的分離鑒定和藥敏試驗，篩選出有效降低內(nèi)生菌污染的抗生素種類及配方。主要研究結果如下:
　　1.玉簪組織培養(yǎng)體系的建立
　　芽誘導培養(yǎng)中，外植體的最佳選材部位是頂芽，誘導率達62‰且污染率較

2、低;用0.1％升汞溶液進行外植體消毒處理，最適宜的滅菌時間為16min;初代誘導培養(yǎng)的最適宜培養(yǎng)基配方是MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1 mg/L。
　　繼代芽增殖培養(yǎng)中，篩選出的培養(yǎng)基配方為MS+KT0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L，增殖系數(shù)達4.8。比較三種激素的F值可判斷6-BA是影響不定芽繼代增殖培養(yǎng)的主要因子，對不定芽增殖影響的程度依次為6-BA＞KT＞NAA。玉簪不定芽接種以2-3

3、個芽叢，培養(yǎng)基的pH值調(diào)為6.0，每天光照時間12h，光照強度2000lx，繼代周期40d，繼代次數(shù)不超過15次，增殖效果最好。優(yōu)化培養(yǎng)設計方案時，以白糖替代蔗糖，以自來水替代蒸餾水，可降低試驗成本，簡化試驗流程。
　　壯苗生根培養(yǎng)中，篩選出適宜的培養(yǎng)基配方為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+AC200mg/L。
　　玉簪試管苗煉苗移栽，適宜的煉苗時間為智能溫室打開瓶蓋2d后，移栽至草炭∶珍珠巖=3∶1的栽

4、培基質(zhì)中，成活率最高98.47％，且長勢良好。
　　2.玉簪試管苗內(nèi)生菌污染控制研究
　　在內(nèi)生菌分離鑒定與藥敏試驗中，使用VITEK-2-Compact15全自動微生物鑒定系統(tǒng)鑒定本試驗中玉簪試管苗污染的菌種為克氏庫克菌，可信度99％。通過藥敏試驗可知，該菌對鏈霉素和林可霉素有不同程度的耐藥性，而慶大霉素、阿莫西林、四環(huán)素等13種抗菌藥物對克氏庫克菌的滋生抑制效果較好。
　　添加抗生素降低玉簪試管苗污染試驗，將污染的