蜘蛛蘭褐斑病及其病原菌鑒定與病害的藥劑控制試驗(yàn).pdf

1、蜘蛛蘭(Hymenocallis littoralis(Jacq．)Salisb，石蒜科Amaryllidaceae)是我國(guó)廣泛栽培的、具有重要觀賞和藥用價(jià)值的一種二級(jí)保護(hù)植物。近年來(lái)，在其上發(fā)現(xiàn)了一種褐斑病，嚴(yán)重的影響了蜘蛛蘭的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。查閱現(xiàn)有文獻(xiàn)，有關(guān)蜘蛛蘭這種病害目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)研究報(bào)道。本研究通過(guò)采集重慶不同地區(qū)蜘蛛蘭褐斑病病葉標(biāo)本，進(jìn)行了組織分離純化、并經(jīng)致病性測(cè)定、形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定明確致病菌、病原菌生物學(xué)特

2、性研究、藥劑的室內(nèi)毒力測(cè)定，以及田間藥效試驗(yàn)的研究，以期為制定安全經(jīng)濟(jì)有效的病害綜合控制策略和技術(shù)措施提供科學(xué)依據(jù)。 蜘蛛蘭褐斑病的主要癥狀及病原菌的分離：該病害主要侵染蜘蛛蘭葉片，病斑初期圓形、卵圓形或梭形，外緣有淡黃色暈圈，中部組織死亡呈褐色。隨著時(shí)間的增長(zhǎng)病斑呈現(xiàn)梭形褐色長(zhǎng)條大斑，有時(shí)幾個(gè)病斑聯(lián)合，致使葉片大部分組織枯死。通過(guò)組織分離法對(duì)褐斑處進(jìn)行病原菌分離純化后，得到多個(gè)真菌菌株，根據(jù)柯赫氏證病律進(jìn)行致病性測(cè)定，判定其中

3、兩個(gè)菌株為該病的病原物，分別命名為SLD1和SLD2。用這兩個(gè)菌株分別接種和復(fù)合接種后均使蜘蛛蘭葉片產(chǎn)生病斑，單獨(dú)接種引致的病斑略有差異，復(fù)合接種的癥狀與田間植株癥狀相同，并從接種各發(fā)病的組織中再分離得到原來(lái)的病原菌，由此最終確認(rèn)這兩個(gè)菌株是引起蜘蛛蘭褐斑病的病原菌，而蜘蛛蘭褐斑病則是這兩種病菌復(fù)合侵染而致。 蜘蛛蘭褐斑病菌的形態(tài)學(xué)特征與鑒定：菌株SLD1分生孢子盤生于寄主植物表皮下，分散或合生，成熟后不規(guī)則開裂，淺盤狀，有剛毛

4、，褐色至暗褐色，表面光滑，至頂端漸尖。在PDA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)菌落圓形，氣生菌絲較發(fā)達(dá)，白色，絨毛狀，邊緣較整齊，7-8d后，菌落中心表面長(zhǎng)出橘紅色、具光澤且濕潤(rùn)的分生孢子堆，這使得整個(gè)菌落呈淡粉色。分生孢子梗較短，呈柵狀排列于分生孢子盤底部，無(wú)色至褐色，基部分枝，光滑。分生孢子長(zhǎng)橢圓形或短圓柱形，無(wú)色，單孢，分生孢子內(nèi)有1-2個(gè)油球，大小為16.0-24.5×4.8-6.0μm。菌絲無(wú)色，分隔非常明顯，直徑約1.2-2.4μm。實(shí)驗(yàn)

5、室培養(yǎng)和田間調(diào)查未發(fā)現(xiàn)該病原菌的有性時(shí)期。 菌株SLD2分生孢子盤杯狀，散生或集生，初埋生后外露，黑色或暗褐色底層由厚壁、角狀、暗褐色細(xì)胞構(gòu)成，盤表面產(chǎn)孢區(qū)細(xì)胞壁薄，色淡。在PDA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)5d菌落圓形，氣生菌絲較發(fā)達(dá)，白色，短絮狀，呈輻射狀擴(kuò)展，4-5d后菌落表面長(zhǎng)出黑色油球狀或不規(guī)則狀、具光澤而濕潤(rùn)的分生孢子堆，呈放射狀分布；隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，分生孢子堆大量產(chǎn)生，有的在菌落表面聯(lián)合成片。分生孢子梗較短，著生于分生孢子盤

6、基部，無(wú)色或淺褐色，分隔，不規(guī)則分枝。分生孢子紡錘形或倒棍棒狀，大小為15.6-27.5×4.5-7.6μm，直或稍微彎曲，5個(gè)細(xì)胞，各細(xì)胞之間分隔均為真隔膜，兩端細(xì)胞壁薄，無(wú)色，中間3個(gè)細(xì)胞呈橄欖褐色；頂部細(xì)胞無(wú)色，圓錐形，比次頂部細(xì)胞直徑明顯變小，頂端附屬絲2-3條，基部細(xì)胞無(wú)色倒圓錐形，中生式尾毛1根，約為附屬絲長(zhǎng)度的1/4。菌絲無(wú)色，分隔，直徑約1.5-2.5μm。實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和田間調(diào)查未發(fā)現(xiàn)該病原菌的有性時(shí)期。 根據(jù)上述

7、特征，SLD1和SLD2分別屬于刺盤孢屬(Colletotrichum)和擬盤多毛孢屬(Pestalotiopsis)真菌。 病原菌的分子鑒定：通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分別對(duì)菌株SLD1和SLD2核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(rDNA ITS)的特異性擴(kuò)增，得到了長(zhǎng)度分別為553bp和586bp的特異性片段(GenBank登錄號(hào)分別為：GQ119342和GQ119343)，BLAST比對(duì)后，明確SLD1的無(wú)性時(shí)期為盤長(zhǎng)孢狀刺盤孢

8、(Colletotrichum gloeosporioides)，SLD2無(wú)性時(shí)期為韋斯梅擬盤多毛孢(Pestalotiopsis vismiae)。 病原菌的主要生物學(xué)特性：PDA培養(yǎng)基最適SLD1菌株生長(zhǎng)，其產(chǎn)孢強(qiáng)度也最大；最適生長(zhǎng)溫度為25-30℃，最適產(chǎn)孢溫度為25℃；該菌在pH7-8范圍內(nèi)可較好地生長(zhǎng)，pH10.0最適產(chǎn)孢；該菌對(duì)葡萄糖、麥芽糖、蔗糖三種碳源及牛肉膏、蛋白胨西種氮源利用最好，葡萄糖和牛肉膏上產(chǎn)孢強(qiáng)度大；

9、光照時(shí)間對(duì)菌絲生長(zhǎng)沒(méi)有影響，但能抑制產(chǎn)孢及孢子萌發(fā)；菌絲的致死條件為60℃處理10 min；分生孢子在pH4.0-12.0均可萌發(fā)，其最適萌發(fā)pH為7.0。 SLD2在PDA培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)最好，PSA培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大；最適生長(zhǎng)溫度為25-30℃，最適產(chǎn)孢溫度為25℃；該菌在pH6.0時(shí)最適生長(zhǎng)，其產(chǎn)孢強(qiáng)度也最大；該菌對(duì)葡萄糖、乳糖兩種碳源及牛肉膏、蛋白胨兩種氮源的利用效果最好，葡萄糖和牛肉膏上產(chǎn)孢強(qiáng)度最大；光照時(shí)間對(duì)菌絲生長(zhǎng)沒(méi)

10、有影響，但利于產(chǎn)孢；菌絲的致死條件為55℃處理10min；分生孢子在HPDA培養(yǎng)基上萌發(fā)率最高；pH為6.5時(shí)最適孢子萌發(fā)。 控制蜘蛛蘭褐斑病的藥劑篩選：將供試的7種藥劑進(jìn)行室內(nèi)生物測(cè)定，除硫酸鏈霉素和井崗霉素沒(méi)有明顯抑制作用外，多菌靈、甲基托布津、武夷菌素、代森錳鋅和百菌清對(duì)兩種病原菌都具有抑制作用，其中對(duì)SLD1的EC50分別為0.33917、0.82777、7.93466、46.8933和261.82750μg/mL，對(duì)S