哈薩克綿羊MHC包蟲病抗性、非抗性個體細粒棘球六鉤蚴侵染期小腸差異表達基因的分離.pdf

1、棘球蚴病(Echinococcushydatiddisease)即包蟲病(Hydatiddisease)，是制約新疆綿羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要疾病之一，同時其又是一種人畜共患病，對牧民的身體健康也構成了嚴重威脅。主要組織相容性復合體(majorhistocompatibilitycomplex，MHC)是由許多緊密連鎖、高度多態(tài)的基因位點組成的染色體上的一個基因系統(tǒng)，因其高度的多態(tài)性和在抗原遞呈中的重要作用，成為疾病相關基因研究的熱點之一，已證

2、實人MHC的多態(tài)性與多種疾病具有相關性。在綿羊MHC研究方面，本試驗室即在前期研究中篩選出了哈薩克綿羊細粒棘球蚴病抗性、非抗性相關的MHC基因單倍型，并進行了初步的驗證。但對此抗性相關MHC基因單倍型哈薩克綿羊個體抗包蟲的分子作用機制尚不知曉。為此，本試驗在此前期研究的基礎上，采用抑制性消減雜交技術構建了哈薩克綿羊MHC抗性、非抗性個體，細粒棘球六鉤蚴小腸侵染期小腸組織的消減文庫，并對差異表達基因進行了初步分析，為進一步揭示哈薩克綿羊M

3、HC包蟲病抗性相關基因單倍型個體抗包蟲的分子作用機制提供研究基礎。結果如下：
　　1、依據(jù)試驗室前期研究中，采用PCR-RFLP技術獲得哈薩克綿羊細粒棘球蚴病抗性、非抗性相關MHC基因單倍型的方法，對250只哈薩克綿羊進行了分析，篩選出了細粒棘球蚴病抗性和非抗性相關MHC基因單倍型的哈薩克綿羊14只和22只。進一步對篩選出來的綿羊個體進行了細粒棘球蚴抗體的ELISA檢測和肝臟部位的B超探測，選取ELISA檢測結果為陰性同時B超探測

4、肝臟部位無包囊的抗性和易感性個體各3只。以每只綿羊飼喂約5000個成熟細粒棘球絳蟲蟲卵進行人工感染，建立了MHC包蟲病抗性、非抗性哈薩克綿羊細粒棘球蚴六鉤蚴侵染期模型。
　　2、采用抑制性消極雜交技術建立了MHC包蟲病抗性、非抗性哈薩克綿羊細粒棘球蚴六鉤蚴侵染期小腸組織的正反向消減文庫。以管家基因GAPDH進行了消減效率的檢測，兩個文庫的消減效率均達到了25以上，提示所建文庫的質(zhì)量較好，能夠用于后續(xù)的進一步分析。
　　采用菌

5、液PCR技術對正向（抗性相關組為Tester）和反向（非抗性組為Tester）消減文庫中的陽性克隆進行了分析驗證，結果顯示，插入片段大小均在150bp-1000bp之間，符合實驗預期。又分別從正反向文庫中隨機挑選了57個和45個的陽性克隆（單一條帶，且大小大于150bp）進行了測序分析。分別獲取了單一EST序列43個和40個。通過NCBI數(shù)據(jù)庫的Blast功能對所獲EST序列進行了同源性分析。
　　采用實時定量PCR技術，對3個E