牙鲆和石鰈血液指標(biāo)測定、血細(xì)胞形態(tài)觀察及核型分析.pdf

1、本試驗(yàn)以牙鲆和石鰈為研究對象，應(yīng)用常規(guī)的血液學(xué)指標(biāo)測定方法和血細(xì)胞涂片法，測定二者的血液學(xué)指標(biāo)，并觀察其血細(xì)胞形態(tài);采用外周血細(xì)胞培養(yǎng)法制備染色體標(biāo)本，經(jīng)Giemsa染色、鏡檢、拍照后進(jìn)行核型分析。研究結(jié)果如下:
　　 1.牙鲆的紅細(xì)胞密度為(2.44±0.14)×106個(gè)/mm3;白細(xì)胞密度為(3.28±0.45)×104個(gè)/mm3;血紅蛋白含量為(6.27±0.42)g/100mL;紅細(xì)胞滲透脆性為(0.45±0.01)g％

2、;沉降率為(5.73±0.25)mm/h。石鰈的紅細(xì)胞密度為(2.84±0.26)×106個(gè)/mm3;白細(xì)胞密度為(5.30±0.14)×105個(gè)/mm3;血紅蛋白含量為(6.44±0.15)g/100mL;紅細(xì)胞滲透脆性為（0.45±0.05）g％;沉降率為(4.57±0.07)mm/h。
　　 2.采用外周血液進(jìn)行涂片觀察，在涂片上可區(qū)分出牙鲆和石鰈的紅細(xì)胞和5種白細(xì)胞，他們分別是淋巴細(xì)胞、血栓細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、

3、嗜酸性粒細(xì)胞，未見嗜堿性粒細(xì)胞。其中淋巴細(xì)胞的體積最小，單核細(xì)胞的體積最大;在白細(xì)胞中，淋巴細(xì)胞數(shù)量最多，其次是血栓細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量最少;此外還可見正在分裂的紅細(xì)胞，說明紅細(xì)胞可在外周血中直接分裂。
　　 3.采用外周血細(xì)胞培養(yǎng)法制備染色體標(biāo)本，用RPMI1640全血培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，從血液保存時(shí)間、刺激源PHA（植物血球凝集素）和ConA（刀豆蛋白A）等方面對外周血細(xì)胞的培養(yǎng)及其染色體制備條件進(jìn)行探討，建立較成熟的外周血

4、淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及染色體制備的方法。結(jié)果表明:血液在4℃保存3d后細(xì)胞仍可正常生長，ConA和PHA兩種刺激源均能促進(jìn)外周血細(xì)胞的分裂增殖，從血細(xì)胞形態(tài)和白細(xì)胞數(shù)目來看，以ConA為刺激源的作用效果好于以PHA為刺激源的作用效果，培養(yǎng)時(shí)間以72h最好。牙鲆血細(xì)胞在21℃，以終濃度為0.1mg/mL的ConA為刺激源培養(yǎng)72h，在結(jié)束培養(yǎng)前4h加入終濃度1.5μg/mL秋水仙素，低滲35min可獲得較好的染色體分裂相。石鰈血細(xì)胞在16℃，以終