不同佐劑對金黃色葡萄球菌CP8-FnBPB-ClfA多價毒力因子疫苗免疫效果影響的研究.pdf

1、奶牛乳房炎(Bovine mastitis)是由于奶牛乳腺組織被外界因素所刺激而發(fā)生的炎癥反應。奶牛患乳房炎后，乳腺組織遭到損傷，導致組織病變、乳中體細胞數增加、產奶量和牛奶品質下降。由于病原微生物是導致奶牛乳房炎的最主要因素，因此，本研究針對金黃色葡萄球菌性奶牛乳房炎，在本實驗室過去的研究基礎上，自制了CP8-FnBPB-ClfA金黃色奶牛乳房炎疫苗，并通過兔乳房炎模型對佐劑進行篩選，確定其免疫途徑后，與CP8-FnBPB-ClfA配

2、合免疫奶牛，評價其免疫效果，結果如下:
　　1.在以前的基礎上，提取出已被本實驗室鑒定為血清8型S.aureus的莢膜多糖1.7970g，將含FnBPB-ClfA融合蛋白的質粒在大腸桿菌中表達并將其與CP8偶聯，得到CP8-FnBPB-ClfA。
　　2.以CP8-FnBPB-ClfA為疫苗，分別配合弗氏佐劑、鋁膠鹽水佐劑、脂質體佐劑和大腸桿菌不耐熱腸毒素B(LTB)佐劑，對新西蘭大耳白兔進行免疫，在免疫后不同時期，通過間接

3、ELISA法和Western blot對各組兔血清中的抗體進行監(jiān)測，評價體液免疫效果;通過檢測Th1/Th2類細胞因子水平檢測及T淋巴細胞增殖試驗評價細胞免疫效果。抗體檢測結果顯示，以脂質體為佐劑的試驗組7d時開始產生抗體，產生抗體最早，但14d后抗體水平就開始下降;以LTB為佐劑的試驗組抗體水平最高，持續(xù)時間最長。Th1/Th2類細胞因子水平檢測結果顯示，各試驗組Th1/Th2類細胞因子水平均有不同程度的提高，以ALUM與LTB作為佐

4、劑，免疫效果優(yōu)于弗氏佐劑及脂質體試驗組，但ALUM與LTB試驗組差別不大。T淋巴細胞增殖試驗結果顯示，經ConA刺激后，各組T淋巴細胞普遍增殖，無顯著差異，刺激指數都在1.0左右;用抗原刺激的組中，以LTB為佐劑的組T淋巴細胞增殖能力最強，刺激指數為2.23。在對免疫部位進行篩選后，進行攻毒試驗。結果證實，3次免疫部位均為肌肉時，所產生的抗體滴度最高，能夠在最大程度上提高Th1/Th2類細胞因子水平。攻毒試驗結果所示，自制疫苗保護率可達

5、80％。
　　3.用鋁膠鹽水(ALUM)佐劑配合CP8-FnBPB-ClfA偶聯物免疫本動物，通過檢測發(fā)現，將免疫組與對照組相比，免疫組的體細胞數下降至正常范圍或保持在正常范圍內不變，對照組體細胞數升高超出正常范圍或在非正常范圍內不變;通過對免疫組與對照組乳汁中的細菌分離鑒定結果發(fā)現，免疫組乳汁中的金黃色葡萄球菌隨免疫天數的增加逐漸減少，而對照組乳汁中的金黃色葡萄球菌隨天數的增加呈逐漸增多的趨勢。通過ELISA，評價奶牛血清及乳汁