MDV與REV感染肉雞時的相互作用和MDV重組野毒株的研究.pdf

1、為了研究雞馬立克氏病病毒(MDV)和網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病病毒(REV)共感染時的相互作用，分別在REV母源抗體陽性(REV-Ab+)和陰性(REV-Ab-)及經(jīng)MDV疫苗CVI988株免疫和不免疫的商品代肉雞，比較了二種病毒在病毒血癥水平和特異抗體效價上的相互影響。結(jié)果表明，在經(jīng)MDV弱毒疫苗CVI988/Rispens株免疫的雞，如果有REV母源抗體預(yù)防REV病毒血癥，在接種強(qiáng)毒MDV后，5周齡時都檢不到強(qiáng)毒MDV病毒血癥。但在REV-Ab

2、-雞，在顯示REV病毒血癥的同時，也顯示強(qiáng)毒MDV的病毒血癥。而在未經(jīng)CVI988/Rispens免疫的雞，雖然在有REV-Ab+的雞(133.3±326.6)的REV病毒血癥比REV-Ab-的雞(1808.3±1413.7)低的多，在MDV病毒血癥水平上沒有任何區(qū)別。但是，卻比經(jīng)MDV弱毒疫苗CVI988/Rispens株免疫但REV-Ab-的雞高的多(41.67±33.7)。這表明，REV共感染時MDV病毒血癥水平的影響主要是通過降

3、低CVI988/Rispens疫苗的免疫效力發(fā)揮作用的。 同是在REV-Ab-雞，強(qiáng)毒MDV病毒血癥水平的高低并不影響攻REV后的病毒血癥水平。但是，在都有REV母源抗體的雞，如果不使用CVI988/Rispens疫苗預(yù)防MDV病毒血癥，MDV共感染造成的某種免疫抑制，使REV母源抗體陽性的雞不再能完全有效地抵抗REV感染造成的病毒血癥。 在用CVI988/Rispense免疫的雞，其誘發(fā)的MDV特異性抗體效價受REV病

4、毒血癥的影響很大，特別是在有REV母源抗體的1和7組，在接種REV后均不會有病毒血癥，其MDV特異性抗體效價分別是3.8±0.8(Log10)和4.2±1.0(Log10)，顯著高于沒有REV母源抗體而會產(chǎn)生REV病毒血癥的2組和8組的1.8±1.0(Log10)和2.3±1.6(Log10)。結(jié)果表明，REV感染將顯著地抑制CVI988/Rispense免疫誘發(fā)的抗體水平。 在未經(jīng)CVI988/Rispense免疫的雞，分別有

5、REV母源抗體或無REV母源抗體。雖然都在1日齡接種了REV，然而REV病毒血癥水平可能差異很大。經(jīng)測定的3組和4組的結(jié)果表明，雖然二組REV病毒血癥水平差異很大(133.3±326.6PFU/ml對1808.3±1413.7PFU/ml)，但二組間由橫向感染強(qiáng)毒MDV誘發(fā)的特異性抗體效價無顯著差異。這表明，REV共感染對強(qiáng)毒MDV感染誘發(fā)的抗體水平無顯著影響。 但是，都是在有母源抗體的情況下，經(jīng)CVI988/Rispense疫

6、苗免疫從而有效預(yù)防MDV病毒血癥的雞，其REV抗體效價分別為4.5±1.4(Log10)和5.7±0.8(Log10)，均高于未經(jīng)CVI988/Rispense免疫因而有MDV病毒血癥的雞的3.3±1.2(Log10)和4.2±1.2(Log10)。其中經(jīng)CVI988/Rispense免疫又沒有注射MDV強(qiáng)毒的7組(5.7±0.8(Log10))又高于雖經(jīng)CVI988/Rispense免疫但注射了強(qiáng)毒MDV的1組(4.5±1.4(Log

7、10))。顯然，MDV共感染確實能抑制REV誘發(fā)的抗體效價。 用間接免疫熒光抗體試驗(IFA)發(fā)現(xiàn)在馬立克氏病病毒(MDV)野毒GX0101株中同時有禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒(REV)。為了從血液中分離MDV，而不含有REV，用體內(nèi)有REV母源抗體的三黃雞，3日齡接種共感染REV的MDV野毒株GX0101(1000PFU/ml)。60日齡時采血接種細(xì)胞分離病毒，經(jīng)IFA檢測，已不存在REV，但可檢測到MDV野毒株。根據(jù)REV前病

8、毒cDNA序列設(shè)計分別擴(kuò)增env基因和LTR基因的兩對引物，利用MDV野毒株GX0101的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果沒有擴(kuò)出env基因，但可擴(kuò)增出LTR基因。這也證明從雞體分離得到的MDV野毒株中已經(jīng)不再混有REV。而且此MDV野毒株基因組中插入了REVLTR基因片段。 將實驗室分離的MDV重組病毒野毒株GX0101在細(xì)胞培養(yǎng)上經(jīng)兩次空斑化，然后利用克隆化病毒感染CEF的基因組DNA為模板，根據(jù)MDV基因組上易插入REV的

9、LTR的高頻位點的序列和REV的LTR序列合成引物，由此交叉配對，以GX0101感染的細(xì)胞基因組為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，克隆到已整合進(jìn)MDV基因組中的REVLTR序列及其相連的序列。然后從克隆的REVLTR序列中合成一條REV引物，在MDV基因組上設(shè)計另一條引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，克隆到整合進(jìn)MDV的REV-LTR片段的另一部分及其相連的序列。對PCR產(chǎn)物克隆測序，插入GX0101株基因組中的REVLTR片段大小為540bp。這是國內(nèi)外首