AtCBF1基因轉(zhuǎn)化水稻和擬南芥的比較研究.pdf

1、低溫是影響植物生長的重要環(huán)境限制因素.植物在低溫處理后,一方面,傳遞低溫信號和調(diào)控基因表達的調(diào)節(jié)性蛋白被誘導(dǎo),另一方面,直接保護細(xì)胞的功能性蛋白也被誘導(dǎo).擬南芥CBF1基因,是一個響應(yīng)低溫的轉(zhuǎn)錄激活因子,能開啟一系列抗冷相關(guān)基因的表達.該實驗以CBF1基因為主要研究對象,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻愈傷組織和擬南芥植株,并對轉(zhuǎn)基因后代開展了抗凍性、形態(tài)變異觀察、T-DNA插入位點分析以及遺傳穩(wěn)定性分析.同時還制作了一系列供深入研究CBF1功

2、能的擬南芥遺傳材料.取得以下主要結(jié)果:1、將CBF1基因與CaMV-35S啟動子融合構(gòu)建植株表達載體pCAMBIA1301-CBF1,以農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻成熟胚愈傷組織和擬南芥植株,獲得轉(zhuǎn)化植株.經(jīng)CBF1基因的PCR鑒定和轉(zhuǎn)基因后代(水稻T1和擬南芥T1、T2和T3代)的潮霉素抗性分析和GUS報告基因分析,獲得單位點插入的轉(zhuǎn)基因水稻株系2個,擬南芥單位點插入的轉(zhuǎn)基因純系1個.2、水稻植株和懸浮細(xì)胞的脯氨酸含量測定及小苗凍害觀測結(jié)果表

3、明,CBF1基因的表達有利于提高轉(zhuǎn)基因植株的脯氨酸含量,進而提高植株的抗凍能力.3、轉(zhuǎn)基因水稻植株不產(chǎn)生矮化等表型變異;轉(zhuǎn)基因擬南芥表型變異明顯,3號株系出現(xiàn)白化葉等表型變異,但這些表型變異可能是由T-DNA插入突變引起.4、利用Tail-PCR法進行T-DNA插入位點分析.在水稻基因組中檢測到T-DNA的存在,但具體位置不能確定.擬南芥轉(zhuǎn)基因植株中,確定了2個株系的插入位點.1號株系,插入在l號染色體上的一個Atlgll670(功能未