2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、哺乳動物腫瘤抑制基因Discs large homologue1(Dlg1),是膜相關鳥苷酸激酶((membrane-associated guanylate kinase,MAGUK)家族的一員,通過PDZ區(qū)與其他分子相互作用參與微管極化,心體再定向以及細胞遷移。Dlg1突變時,會出現(xiàn)微絲和微管的異常組裝而導致的細胞極性異常,如:柱狀上皮細胞去極化和細胞粘附分子的異常分布(呂鴻2010)。小鼠卵母細胞減數(shù)分裂過程中Dlg1表現(xiàn)為極性分

2、布,并且這種極性分布與細胞骨架微絲微管之間存在著密切關系。本研究以豬卵母細胞為材料,旨在觀察Dlg1在豬卵母細胞體外成熟和早期胚胎發(fā)育進程中的表達定位,并在此基礎上通過RNA干擾技術,引入外源性siRNA,進一步研究Dlg1在這兩個發(fā)育過程中的作用。試驗結果如下:
  1、通過QRT-PCR檢測了豬多種組織細胞中Dlg1的mRNA表達水平。結果發(fā)現(xiàn)卵巢組織和肺組織中Dlg1的表達量最高,PEF中表達量最低。
  2、免疫熒光

3、染色檢測豬卵母細胞和早期胚胎中Dlg1的蛋白表達和分布。發(fā)現(xiàn),在GV期豬卵母細胞中,Dlg1在整個胞質和細胞核均勻分布,從GVBD~PreMⅠ開始到MⅡ胞質中Dlg1逐漸向中心聚集,蛋白顆粒更明顯,皮質處的分布明顯減少;孤雌激活后的早期胚胎中,Dlg1在整個胞質彌散分布,但表達量逐漸下降2cell、4cell、囊胚期分別只有MⅡ期的46.9%、58.4%、29.66%。
  3、通過QRT-PCR和免疫熒光染色方法來篩選Dlg1的

4、有效siRNA序列,結果顯示siRNA-2干擾效率最高,可分別在mRNA和蛋白水平上下調Dlg1表達的82.1%和61.28%。
  4、通過顯微注射的方法將Dlg1 siRNA-2注射到GV期的豬卵母細胞胞漿和孤雌激活后2h的胚胎中。結果顯示:siRNA-2注射組的第一極體排出率為25.2%±3.3%,與對照組(73.4%±4.7%)相比顯著下降,說明下調Dlg1能顯抑制豬卵母細胞體外成熟。而且,免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)下調Dlg1后影

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