紫栗紫威再生體系的建立和遺傳轉(zhuǎn)化初探.pdf

1、紫栗紫威(Purple Majesty'Pennisetum glaucum(L)R.Br.)是禾本科狼尾草屬植物，是一種新型的觀賞草。隨著世界園林綠化的發(fā)展，草坪草已不能滿足人們的需要，觀賞草以其優(yōu)美的形態(tài)、豐富的色彩、良好的適應(yīng)性，逐漸進(jìn)入園林景觀設(shè)計(jì)師的視野。紫栗紫威葉片、莖稈和花穗皆為深紫色，花穗呈香蒲狀，用于全日強(qiáng)光或部分遮蔭的景觀環(huán)境中，幼苗為綠色，在長出8片葉子后，植株的莖桿和主葉脈首先開始變紫，有很強(qiáng)的觀賞性，而且紫栗紫

2、威耐旱、耐高溫。但是紫粟紫威不耐低溫，16℃以下基本上就不能存活了，因此“紫粟紫威”在春秋基本上就不能再用了。這可能是紫粟紫威最大的應(yīng)用局限了。本實(shí)驗(yàn)通過對紫栗紫威再生體系的建立，以對愈傷組織進(jìn)行抗寒基因的轉(zhuǎn)入來增強(qiáng)紫栗紫威的抗寒性，從而為紫栗紫威的大量推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　 1.紫栗紫威再生體系的建立
　　 以紫粟紫威的成熟種子為材料，以N6為基本培養(yǎng)基，初步建立了紫栗紫威的再生體系：種子表面滅菌方式為：先75％乙醇

3、浸泡1 min，然后0.1％升汞浸泡13 min；在附加2.0 mg/L2,4-D，0.3 mg/L6-BA，690mg/L脯氨酸，500mg/L水解酪蛋白，3％蔗糖和6g/L卡拉膠的N6培養(yǎng)基中愈傷誘導(dǎo)率最高，達(dá)100％；在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加100 mg/L Vc可以有效抑制愈傷褐化；附加0.1 mg/L6-BA和0.2％活性炭的N6培養(yǎng)基愈傷分化率最高，達(dá)90％；生根培養(yǎng)基為附加3％蔗糖和6g/L卡拉膠的1/2 MS培養(yǎng)基。
　

4、　 2.紫栗紫威遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步研究
　　 以紫栗紫威的愈傷組織作為外植體，并利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法將臘梅冷適應(yīng)蛋白基因Cpcor413pml轉(zhuǎn)入紫栗紫威愈傷組織之中，對影響轉(zhuǎn)化效率的因素進(jìn)行了初步研究，通過GUS基因瞬時(shí)表達(dá)的檢測，探討了預(yù)培養(yǎng)，不同類型侵染液，農(nóng)桿菌菌液濃度，侵染時(shí)間，共培養(yǎng)時(shí)間，AS濃度對紫栗紫威愈傷組織轉(zhuǎn)化的影響。結(jié)果表明以上因素是農(nóng)桿菌介導(dǎo)的紫栗紫威遺傳轉(zhuǎn)化的重要影響因素。優(yōu)化后的轉(zhuǎn)化方法為

5、：將紫栗紫威愈傷組織接種到N6+2.0 mg/L2,4-D+0.3 mg/L6-BA+100 mg/LVc+690mg/L脯氨酸+500mg/L水解酪蛋白的培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)3～5天；將第二次活化后OD600值為1.0的農(nóng)桿菌菌液離心后收集菌體，加入液體MS+AS100um/L，重懸到OD600值為0.7左右，將預(yù)培養(yǎng)后的愈傷組織置于重懸后的菌液中浸染15min，期間不停的振蕩，在超凈工作臺(tái)上將侵染后的愈傷組織接種于N6+2.0 mg/L2

6、,4-D+0.3 mg/L6-BA+100 mg/L Vc+690mg/L脯氨酸+500mg/L水解酪蛋白的共培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)3d；取出共培養(yǎng)的愈傷組織用MS+500mg/LCef振蕩脫菌30min，再用無菌水沖洗5次以上；無菌濾紙吸干水分后接種到N6+0.1 mg/L6-BA+100 mg/L Vc+0.2％活性炭+690mg/L脯氨酸+500mg/L水解酪蛋白30mg/LG418+200mg/LCef中進(jìn)行篩選培養(yǎng)；在最優(yōu)條件下紫栗