產(chǎn)幾丁質(zhì)酶木霉的誘變選育及對(duì)玉米紋枯病的生物防治.pdf

1、玉米紋枯病屬世界性土傳病害，在我國(guó)各玉米產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生。近年來(lái)，其危害逐年加重，紋枯病已成為我國(guó)西南地區(qū)玉米生產(chǎn)最嚴(yán)重的病害之一。目前，常規(guī)育種難以選擇到多抗性的植株，土傳病害防治困難，化學(xué)防治具有很大的局限性，本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)木霉菌的篩選和改良，以期能從生物防治途徑控制病害的發(fā)生，降低危害程度。試驗(yàn)結(jié)果表明：
　　 1.從雅安四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)場(chǎng)采集發(fā)生紋枯病的玉米葉鞘分離得到病原菌，經(jīng)鑒定為立枯絲核菌(Rhizoctoniasolan

2、i)，屬于AG-1-IA菌絲融合群。用組織分離法從有綠色孢子附著的玉米葉鞘上分離獲得生長(zhǎng)速度較快的木霉菌株40個(gè)，其中哈茨木霉24株、康氏木霉7株、綠色木霉5株、擬康氏木霉4株。木霉生長(zhǎng)速度測(cè)定結(jié)果表明，大多數(shù)木霉生長(zhǎng)速度快、生命力強(qiáng)，能夠迅速占領(lǐng)生長(zhǎng)的空間和營(yíng)養(yǎng)。所有木霉發(fā)酵濾液對(duì)立枯絲核菌的生長(zhǎng)都有抑制作用，效果最好的是T19，抑制率為61.67％。因此，選擇在木霉菌株T19進(jìn)行改良。
　　 2.采用UV、UV+LiCl和D

3、ES三種不同的誘變方法來(lái)獲得具有穩(wěn)定遺傳性的高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶木霉菌株。確定了對(duì)T19的紫外誘變最佳時(shí)間為120s、氯化鋰誘變最佳計(jì)量為0.4％、硫酸二乙酯誘變最佳時(shí)間為40分鐘。其中使用紫外光合氯化鋰復(fù)合誘變獲得的突變菌株UV+LiCl-1的酶活力最高，為1.21U/ml，是出發(fā)菌株的2.52倍，且遺傳穩(wěn)定性良好。
　　 3.采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究了培養(yǎng)基碳源、氮源等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及發(fā)酵培養(yǎng)溫度、時(shí)間等條件對(duì)突變菌株UV+LiCl-1產(chǎn)

4、幾丁質(zhì)酶的影響。結(jié)果表明，產(chǎn)酶培養(yǎng)基的最佳配比為：膠體幾丁質(zhì)10.0g/L、蛋白胨2.0g/L、KH2PO42.0g/L、MgSO4.7H2O0.6g/L。優(yōu)化發(fā)酵的條件為：起始pH6.0、溫度28℃、接種量7％、誘導(dǎo)5d。在此條件下，變異菌株獲得的最高幾丁質(zhì)酶活性進(jìn)一步提高到1.78U/ml，是出發(fā)菌株的3.71倍。
　　 4.采用硫酸銨(NH4)2SO4分級(jí)沉淀法提取幾丁質(zhì)酶液，得到提取木霉幾丁質(zhì)酶的最佳(NH4)2SO4濃

5、度為75％。將粗酶液加入PD培養(yǎng)基中，當(dāng)幾丁質(zhì)酶含量為10％時(shí)，對(duì)立枯絲核菌菌絲干重的抑制率達(dá)到了68.14％，抑制效果明顯。
　　 5.木霉菌株T19和UV+LiCl-1都能夠在玉米根際土壤、根表及葉鞘上定殖。T19在根際土壤、根表土壤和玉米葉鞘菌落形成單位分別為16.67×104個(gè)/g、5.56×104個(gè)/g、8.33×104個(gè)/g；而突變菌株UV+LiCl-1的菌落形成單位分別為34.44×104個(gè)/g、13.33×104