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文檔簡(jiǎn)介
1、柑橘采后因真菌性病害造成的損失嚴(yán)重,其中以青霉(Penicillium italicum)和綠霉(Penicillium digitatum)為主。國(guó)內(nèi)外主要靠化學(xué)藥劑處理進(jìn)行防治。
本文以具有生防潛能的綠色粘帚霉(Gliocladium virens)為對(duì)象研究其發(fā)酵條件和優(yōu)化組合;對(duì)它的拮抗物質(zhì)粗提取,檢測(cè)這些活性物質(zhì)的生理生化性質(zhì),測(cè)定它們對(duì)柑橘青綠霉菌的抑菌活性;在此基礎(chǔ)上,與青綠霉孢子懸浮液以及化學(xué)殺菌劑的處理比
2、較防治效果。本研究的主要結(jié)果如下:
1.從柑橘園土壤中分離得到G.virens菌株共32個(gè)。通過(guò)比較它們對(duì)柑橘青霉病、綠霉病的拮抗性發(fā)現(xiàn),G-3菌株對(duì)柑橘青霉病拮抗性最強(qiáng);G-4菌株對(duì)柑橘綠霉病拮抗性最強(qiáng)。通過(guò)單因素法對(duì)生防菌G-3、G-4菌株的液體培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果表明,優(yōu)化培養(yǎng)基配方為3#液體培養(yǎng)基:菌核粉5g、氯化鈉3g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂(MgSO4.7H2O)3g;同時(shí),初始pH6、培養(yǎng)溫度25℃~30
3、℃、接種量為菌絲圓片5塊、全黑暗振蕩、搖瓶裝液量50mL/250 mL、培養(yǎng)時(shí)間8d時(shí)G.virens發(fā)酵液的抑制作用最強(qiáng)。
2.對(duì)發(fā)酵液的一些理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,發(fā)酵液具有較高的熱穩(wěn)定性;在酸性、中性環(huán)境下比較穩(wěn)定,堿性環(huán)境下不穩(wěn)定;發(fā)酵液4℃下保存半個(gè)月,幾乎能維持不變的抑菌作用;隨時(shí)間的繼續(xù)增長(zhǎng),抑制率下降,一個(gè)月后不再有明顯變化;發(fā)酵液抑菌譜測(cè)定表明,對(duì)柑橘青霉病菌(Penicillium italicu
4、m)、綠霉病菌(Penicillium digitatum)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、終極腐霉病菌(Pythimultimum)、葡萄根霉病菌(Rhizopus stolorifer)均有較強(qiáng)的抑制作用,結(jié)果表明其對(duì)土傳病害具有較強(qiáng)的防治潛力;通過(guò)對(duì)發(fā)酵液經(jīng)蛋白酶處理后的抑菌活性測(cè)定表明,其抑制率明顯降低,表明蛋白酶參加了對(duì)病原菌的抑制作用;經(jīng)不同極性有機(jī)溶劑的溶解性檢測(cè),活性成分易溶于乙酸乙酯
5、、氯仿;通過(guò)顯色反應(yīng)表明,粗提取物呈酸性,其中可能含有酚類(lèi)和酮類(lèi)的特征基團(tuán)。
3.應(yīng)用DNS試劑對(duì)代謝產(chǎn)物中纖維素酶及幾丁質(zhì)酶活力的測(cè)定。G-4菌株的纖維素酶活力優(yōu)于其它菌株為80.94U/mL;G-11菌株幾丁質(zhì)酶活力最高為21.47U/mL。這與G-4,G-11菌株發(fā)酵液的抑菌活性強(qiáng)保持一致性,表明其抑菌活性與這兩種酶活力有一定相關(guān)性。
4.本文采用薄層色譜法(TLC)選擇展開(kāi)劑,乙酸乙酯:氯仿(4:6)
6、的Rf(0.31、0.52、0.634、0.753、0.94),Rf在要求的0.2~0.8之間,有較好分離效果;用硅膠柱層析分離技術(shù)將活性成分從發(fā)酵液中提取分離出來(lái),發(fā)現(xiàn)有三種主要成分具有較強(qiáng)的抑制活性?;钚猿煞?對(duì)柑橘青、綠霉病的抑制率分別為48.32%、60.83%;活性成分2對(duì)柑橘青、綠霉病的抑制率分別為48.01%、57.35%;活性成分3對(duì)柑橘青、綠霉病的抑制率分別為35.28%、55.79%。
5.與孢子懸浮液
7、以及化學(xué)殺菌劑比較,測(cè)定了提取物水溶液對(duì)柑橘青霉、綠霉病的防治作用。果實(shí)處理5d后,CK的病情指數(shù)55.69%,活性物質(zhì)1的對(duì)柑橘青綠霉病的病情指數(shù)分別是29.87%、22.63%,表明活性物質(zhì)1有較強(qiáng)的防腐作用。柑橘果實(shí)室內(nèi)貯藏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,貯藏30d、60d和90d后,各活性成分對(duì)柑橘青霉、綠霉病的發(fā)生均具有不同程度的抑制作用。柑橘果實(shí)室內(nèi)貯藏90d后,活性物質(zhì)1對(duì)柑橘青綠霉的室內(nèi)防效最好,分別為73.22%、71.66%,略低于當(dāng)
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