帚霉新種所致暗色絲孢霉病的臨床與實驗研究.pdf

1、背景:暗色絲孢霉病(Phaeohyphomycosis)，系暗色真菌引起的淺表組織，皮膚，角膜，皮下組織甚至系統(tǒng)性感染。暗色真菌通常為土壤腐生菌和植物病原菌，其孢子廣泛存在于空氣中，其中許多為實驗室常見的污染菌，在人體表面可有短暫的停留。當(dāng)機(jī)體免疫力低下，或患有糖尿病、白血病或長期服用免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素時，病原菌可經(jīng)肺，皮膚傷口進(jìn)入人體引起感染，甚至可以經(jīng)血液循環(huán)播散至全身引起系統(tǒng)性感染。其中一些具有親神經(jīng)性，易侵犯腦和腦膜，引起中

2、樞神經(jīng)系統(tǒng)病變。本文從1例引起皮下暗色絲孢霉病的帚霉新種的分離鑒定開始，圍繞其表型特征、體外藥敏、分子鑒定等方面進(jìn)行了研究。
　　第一部分:報告1例由帚霉新種所致的暗色絲孢霉病并對該菌進(jìn)行分離鑒定和臨床實驗研究。患者男，52歲，左手側(cè)緣疣狀增生性斑塊7年余。發(fā)病前虎口部有外傷史。期間曾予冷凍治療，效不佳。查體:左手掌外側(cè)緣境界清楚疣狀高度增生性斑塊，表面粗糙顆粒狀，少量干燥性血痂，中央皮損部分消退呈環(huán)狀。真菌鏡檢見細(xì)長分隔菌絲，未

3、見硬殼小體;真菌培養(yǎng)可見生長緩慢的暗黑色菌落形成，表面形成放射狀皺褶伴培養(yǎng)基開裂;組織病理學(xué)檢查示表皮角化過度，假上皮瘤樣增生，真皮內(nèi)混合性炎癥細(xì)胞浸潤為主的感染性肉芽腫?；贗TS測序的BLAST分析顯示該菌株位于帚霉屬的獨立分支。診斷:帚霉新種所致皮下暗色絲孢霉病。治療采用斯皮仁諾（伊曲康唑）400mg/日和阿維A20mg/日口服3個月后，皮損完全消退。隨訪半年無復(fù)發(fā)。
　　第二部分:抗真菌藥物體外對抗帚霉新種的敏感性及表型研

4、究:將從臨床患者皮損分離出的帚霉新種分別接種于不同培養(yǎng)基上，觀察其菌落形態(tài)，生長速率。玻片小培養(yǎng)及掃描電鏡鏡下觀察其菌絲及孢子形態(tài)。參照美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(CLSI)的針對產(chǎn)孢絲狀真菌的M38-A2方案進(jìn)行體外藥敏試驗。結(jié)果示:此帚霉新種在不同培養(yǎng)基上表現(xiàn)為不同形態(tài)的菌落，在GC培養(yǎng)基上生長最快，PDA、SDA、MEA培養(yǎng)基上產(chǎn)孢較多。玻片小培養(yǎng)示:淡棕色分支分隔菌絲，分生孢子梗直立，帚狀枝疏散分布，瓶梗頂端產(chǎn)生長短不一、松散性

5、分生孢子鏈。電鏡示:末端膨大的瓶梗，成串的分生孢子鏈及帚狀枝。溫度耐受試驗示此帚霉新種在37℃下生長良好。體外藥敏試驗結(jié)果示此菌株對伊曲康唑及特比萘芬敏感。
　　第三部分:帚霉新種的分子鑒定:DNA提取、擴(kuò)增及測序，將PCR擴(kuò)增片段送到上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司純化并雙向測序。隨后將測序結(jié)果進(jìn)行種系發(fā)生分析。ITS和LSU測序分別獲得567 bp和580 bp的片段，相應(yīng)序列結(jié)果已上傳至GenBank，分別獲得序列號KP76

6、4411和KR006348。基于ITS及LSU的序列結(jié)果與其近源的帚霉屬菌種的序列資料構(gòu)建種系發(fā)生樹。結(jié)果顯示該菌株位于帚霉屬內(nèi)單獨分支上。
　　結(jié)論:1.本病例為帚霉新種所致的暗色絲孢霉病，經(jīng)伊曲康唑及阿維A治療后完全好轉(zhuǎn)。隨訪半年無復(fù)發(fā)。
　　2.經(jīng)表型觀察，此帚霉新種在各培養(yǎng)基上生長情況各不相同;體外藥敏試驗示其對特比萘芬及伊曲康唑敏感。溫度耐受試驗顯示37℃下培養(yǎng)7天可見菌落生長良好。
　　3.分子鑒定:給予I