豬卵母細(xì)胞孤雌激活方法的研究.pdf

1、本研究以豬體外成熟卵母細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，分別采用了單次電激活，二次電激活，化學(xué)激活以及物理化學(xué)聯(lián)合激活方法，對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行孤雌激活，并比較分析了各方法的激活效果。旨在選擇出較好的孤雌激活方法，以提高豬體外成熟卵母細(xì)胞的孤雌激活率和孤雌胚的囊胚發(fā)育率，為提高核移植的成功率，以及進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究包括以下主要內(nèi)容：1.選擇不同的電場(chǎng)強(qiáng)度和脈沖時(shí)程，做單次電激活，比較不同組合對(duì)激活效率的影響。2.固定脈沖時(shí)程及

2、脈沖次數(shù)，分別選擇不同的電場(chǎng)強(qiáng)度，做二次電激活，比較不同組合對(duì)孤雌激活胚早期發(fā)育的影響。3.不同濃度Ionomycin作用不同時(shí)間；Ionomycin分別與6-DMAP、CB及CHx組合；9％Ethanol作用不同時(shí)間，對(duì)每一組合的激活效率進(jìn)行比較，旨在研究較好的化學(xué)激活方法。4.電激活處理結(jié)合化學(xué)試劑（6-DMAP、CB及CHX），比較不同組合對(duì)體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活后孤雌胚早期發(fā)育的影響。
　　 研究結(jié)果表明：
　　

3、 1.對(duì)于單次電刺激對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活參數(shù)的確定，電場(chǎng)強(qiáng)度為2.0kV/cm，脈沖次數(shù)為1次，脈沖時(shí)程分別為10、20和30μs的條件對(duì)孤雌胚早期發(fā)育的影響無顯著差異，且均為較優(yōu)條件，其中以脈沖時(shí)程為30μs最為理想；
　　 2.對(duì)于二次電刺激對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞的孤雌激活參數(shù)選擇，二次電場(chǎng)強(qiáng)度分別2.0kV/cm和1.4kV/cm，脈沖時(shí)程均為30μs，脈沖次數(shù)均為1次的條件為最優(yōu)；
　　 3.不同濃度Io

4、nomycin作用不同時(shí)間對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活效果的影響，Ionomycin濃度為20mmol/L，作用時(shí)間為10min、15min的條件較好，10min最為理想；
　　 4.Ionomycin分別與6-DMAP、CB組合對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活后，孤雌胚的卵裂率和囊胚率高于Ionomycin與CHx組；
　　 5.9％Ethanol作用10min、20min組合對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活后，孤雌胚的卵裂率