小鼠卵母細(xì)胞的孤雌激活及體細(xì)胞核移植方法的研究.pdf

1、小鼠卯母細(xì)胞的孤雌激活及體細(xì)胞核移植方法的研究StudiesRelatedtoParthenogeneticActivationofMouseOocytesandMethodsofSomaticNuclearTransfer本研究由農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因新品種培育重大專項(xiàng)(201lzx08008—004)江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(PAPD)江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目資助研究生：許貽索導(dǎo)師：邢華副教授揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院

2、二零一四年五月?lián)P州大學(xué)碩士學(xué)位論文核可以得到較高的去核效率(827％)，高于盲吸法(49O％)和Hoechest33342染色去核法(804％)，且該法示核清楚，吸取的細(xì)胞質(zhì)較少，對卵母細(xì)胞的損傷較小，操作簡便，減少了去核操作時間。因此蔗糖輔助去核法是較好的去核方法。2細(xì)胞松弛素B(CytochalasinB，CB)濃度對去核效果的影響：實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞核清晰可見的卵母細(xì)胞放入含有CB濃度分別為599／ml、1099／ml、2099／ml的去

3、核操作液中去核，以去核率來檢測去核效果。研究發(fā)現(xiàn)在CB濃度為1099／ml時，去核效果較好(去核率：827％)，顯著高于599／ml和2099／ml濃度下的去核率(去核率分別為642％、513％)。3重構(gòu)胚構(gòu)建方法的比較：本實(shí)驗(yàn)以顆粒細(xì)胞作為供核細(xì)胞，以胞質(zhì)內(nèi)注射法、卵周隙注射法兩種方法對去核卵母細(xì)胞進(jìn)行注核，比較兩種方法的重構(gòu)胚率、卵裂率。研究發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)內(nèi)注射得到的重構(gòu)胚率明顯高于卵周隙注射(736％VS323％)，且重構(gòu)胚后續(xù)發(fā)育能力

4、優(yōu)于卵周隙注射，因此卵胞質(zhì)注射優(yōu)于卵周隙注射。實(shí)驗(yàn)三小鼠胚胎輸卯管移植技術(shù)的建立1不同胚齡的胚胎對輸卵管移植的影響：實(shí)驗(yàn)選用B6D2F1小鼠l一細(xì)胞胚胎、2細(xì)胞胚胎、8細(xì)胞胚胎進(jìn)行輸卵管移植，比較代孕母鼠妊娠率、產(chǎn)仔率，確定最適合輸卵管移植的胚胎發(fā)育期。實(shí)驗(yàn)表明，植入2細(xì)胞胚胎的代孕母鼠的妊娠率為600％、產(chǎn)仔率為29O％，顯著高于1細(xì)胞胚胎(妊娠率：333％；產(chǎn)仔率：136％)和8細(xì)胞胚胎(妊娠率：20O％；產(chǎn)仔率：73％)。2兩種輸