山羊卵母細(xì)胞和孤雌激活胚胎體外無(wú)血清培養(yǎng)的研究.pdf

1、本文為研究山羊卵母細(xì)胞和孤雌激活胚胎在無(wú)血清成熟液和培養(yǎng)液中的成熟、發(fā)育情況而做了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)：(1)山羊卵母細(xì)胞無(wú)血清體外成熟培養(yǎng)；(2)山羊孤雌激活胚胎無(wú)血清體外培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)的目的是為避免血清對(duì)卵母細(xì)胞和胚胎的副作用和不利影響而建立一種山羊胚胎的無(wú)血清體外培養(yǎng)體系。 1.在OM成熟液中分別以0.3％牛血清蛋白(BSA)(m/v)、1％聚乙烯醇(PVA)(m/v)和1％胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白亞硒酸鈉(ITS)(v/v)代替成熟培養(yǎng)液中胎牛血

2、清(FBS)，以添加5％FBS的OM為對(duì)照組，對(duì)來(lái)源于屠宰場(chǎng)的卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)進(jìn)行體外培養(yǎng)。成熟率PVA添加組(50.00％)，極顯著低于FBS組(83.23％)(P<0.01)，BSA組(71.19％)和ITS組(76.79％)與FBS組無(wú)顯著差異(P>0.05)；成熟卵母細(xì)胞用離子霉素聯(lián)合6-DMAP激活，在ScFaa中進(jìn)行孤雌胚培養(yǎng)，BSA、PVA、ITS及FBS各組的卵裂率依次為61.90％、46.97％、79.0

3、7％和83.58％，囊胚率分別為25.00％、19.70％、55.81％和60.45％。結(jié)果表明：在OM基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加BSA或PVA，卵母細(xì)胞的成熟率明顯低于添加FBS，且卵裂率和囊胚發(fā)育率也低于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)；添加ITS，卵母細(xì)胞成熟率雖低于對(duì)照組，但孤雌胚卵裂率和囊胚發(fā)育率與對(duì)照組接近(P>0.05)。 2.在SoFaa胚胎培養(yǎng)液中分別添加1％ITS(v/v)、0.6％BSA(m/v)和0.1％PVA

4、(m/v)，以0.6％BSA(m/v)+10％FBS(v/v)為對(duì)照組，共分為四組對(duì)用離子霉素聯(lián)合6-DMAP孤雌激活的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。在加入ITS、BSA、PVA和BSA+FBS組的卵裂率分別為82.27％、75.10％、72.57％和80.29％；囊胚率分別為38.76％、13.81％、7.73％和56.82％。結(jié)果表明：在SoFaa中加入ITS組的山羊孤雌激活胚胎第一次卵裂率與加入BSA、PVA和BSA+FBS組的差異不顯著

5、(P>0.05)；而囊胚率雖然極顯著高于BSA和PVA組(P<0.01)，但是也極顯著低于加入BSA+FBS組(P<0.01)。 結(jié)論： (1)在本實(shí)驗(yàn)條件下，在OM成熟液中添加ITS可以使卵母細(xì)胞很好的成熟，表明以ITS代替FBS，可用于山羊卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)。 (2)在胚胎培養(yǎng)液SoFaa中添加ITS得到略高于其它組的卵裂率(P>0.05)，所以ITS可代替BSA+FBS用于胚胎第一次卵裂前后的培養(yǎng)；但是由