木糖篩選系統(tǒng)在黃瓜轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用.pdf

1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。據(jù)我所知，除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。對(duì)本人的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中作了明確的說(shuō)明。本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：學(xué)位論文使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解東北師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：東北師范大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子

2、版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)東北師范大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))學(xué)位論文作者簽名：棲‰指導(dǎo)教師簽名：日期：啦么。以日期：學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：通訊地址：電話：——郵編：P●lI‘L，摘要隨著轉(zhuǎn)基因植物商業(yè)化，轉(zhuǎn)基因植物的生物安全性，尤其是轉(zhuǎn)基因植物中的抗性標(biāo)記基因，受到了越來(lái)越多的關(guān)注。因?yàn)槿藗儞?dān)心

3、這些抗性標(biāo)記基因能夠潛在地流向雜草、微生物，對(duì)環(huán)境造成危害，以及植物產(chǎn)生意外的性狀，從而引發(fā)食品或生態(tài)安全問(wèn)題。在植物遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)中，目前應(yīng)用較為廣泛的篩選標(biāo)記基因主要有兩大類：抗生素抗性酶基因和除草劑抗性酶基因。常用的抗性酶基因包括nptfI基因、cat基因、hpt基因、bar基因等。轉(zhuǎn)化的細(xì)胞可以在含有抗生素和除草劑的培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)，因此利用這些標(biāo)記基因的篩選體系都可能存在生物安全性問(wèn)題，因而采用無(wú)害的正篩選系統(tǒng)進(jìn)行植物遺傳轉(zhuǎn)化是

4、基因工程的重要目標(biāo)之一。木糖篩選是一種正選擇篩選體系，木糖異構(gòu)酶基因(XylA)是一種安全的標(biāo)記基因。我們首先通過(guò)七組對(duì)照實(shí)驗(yàn)確定木糖作為選擇劑的最佳濃度。本實(shí)驗(yàn)以大腸桿菌XylA作為選擇標(biāo)記基因，利用木糖作為選擇劑獲得能夠表達(dá)帶有GUS報(bào)告基因的轉(zhuǎn)基因黃瓜。同時(shí)，為了獲得對(duì)腫瘤有積極作用的aFGF的單鏈抗體，本實(shí)驗(yàn)還構(gòu)建了pX390一scFv載體，以木糖作為篩選劑，進(jìn)行黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化研究。本研究初步建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基于木糖選擇系統(tǒng)的黃