同時(shí)檢測(cè)和區(qū)分豬瘟野毒株和兔化弱毒疫苗株及牛病毒性腹瀉病毒1型的三重?zé)晒舛縍T-PCR方法的建立.pdf

1、豬瘟(Classical swine fever，CSF)是由豬瘟病毒(HCV或CSFV)引起的一種高度接觸性傳染病，是危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列入OIE名錄，我國(guó)將其列為一類傳染病。其基因組為單股正鏈RNA，大小約為12.3 kb，含有1個(gè)大的開(kāi)放閱讀框(ORF)，兩側(cè)為高度保守的5'和3'非編碼區(qū)(UTR)。
　　 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)和CSFV同為黃病毒科瘟病毒屬成員，根據(jù)BVD

2、V基因組的差異，我們將其分為兩個(gè)基因型，即基因型1(BVDV-1)和基因型2(BVDV-2)。同屬的成員還包括：綿羊邊界病病毒(BDV)和長(zhǎng)頸鹿瘟病毒(Pestivirus of Giraffe)。由于BVDV不僅可以感染牛還可以感染豬，引起與豬瘟相似的臨床癥狀和病理變化，同時(shí)BVDV與CSFV存在血清學(xué)交叉反應(yīng)，因此很容易被誤診為豬瘟。此外，豬瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)在我國(guó)的大規(guī)模應(yīng)用，使豬瘟野毒感染、疫苗接種的區(qū)分變得非常困難和必

3、要。因此，亟待建立一種可以準(zhǔn)確區(qū)分豬瘟野毒感染、疫苗接種以及BVDV感染的快速、高效、敏感而特異的檢測(cè)方法。
　　 本研究旨在建立一種能同時(shí)區(qū)分CSFV野毒、HCLV和BVDV-1的敏感、特異、重復(fù)性好的三重?zé)晒舛縍T-PCR鑒別檢測(cè)方法。根據(jù)CSFV NS5B區(qū)域分別設(shè)計(jì)了針對(duì)CSFV野毒、HCLV的引物和TaqMan水解探針，依據(jù)BVDV5'-UTR設(shè)計(jì)了一對(duì)針對(duì)BVDV-1的引物和TaqMan水解探針，在優(yōu)化反應(yīng)條件的基

4、礎(chǔ)上，建立了同時(shí)區(qū)分CSFV、HCLV和BVDV-1的三重?zé)晒舛縍T-PCR方法。結(jié)果顯示，該方法能將我國(guó)大陸流行的不同基因亞群的CSFV野毒株、HCLV以及BVDV-1完全區(qū)分開(kāi)來(lái)，而不與其它豬源病毒發(fā)生非特異反應(yīng)，在107-101拷貝/μL范圍內(nèi)，對(duì)CSFV、HCLV和BVDV標(biāo)準(zhǔn)品模板的檢測(cè)具有良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限分別為4.5 TCID50(CSFV野毒)、7.8個(gè)拷貝(HCLV)或3.2 TCID50(BVDV-1)。用