禽波氏桿菌的生物學(xué)特性研究及血清分型的初步探索.pdf

1、禽波氏桿菌病是由禽波氏桿菌引起的一種禽的高度接觸性傳染病，目前對禽波氏桿菌某些生物學(xué)特性已有比較詳細(xì)的研究，但是在其血清分型方面仍少有研究，各血清型之間有無交叉感染以及各型之間的致病性差異也并不清楚，使得防治的針對性存在偏差。這也進(jìn)一步導(dǎo)致了該病在國內(nèi)外的普遍發(fā)生及流行，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。由于該菌既能水平傳播又能垂直傳播，所以在家禽傳代過程中，該病不斷得以放大，給家禽造成更大的危害。因此建立一種系統(tǒng)的血清分型方法并能對地方分

2、離株進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的分型就顯得尤為重要。本研究即根據(jù)實(shí)驗(yàn)室已有菌株分別制備相應(yīng)的抗血清，然后對抗血清進(jìn)行交叉吸收試驗(yàn)，獲得兩種單因子血清，并利用這兩種單因子血清對實(shí)驗(yàn)室地方分離株進(jìn)行鑒定，證明他們分屬于血清Ⅰ型和血清Ⅱ型。
　　 第一部分禽波氏桿菌分離株的生物學(xué)特性研究
　　 2009年，山東省某大型雞場出現(xiàn)雞胚死亡、孵化率降低和雛雞急性死亡的病狀。病雞主要表現(xiàn)以眼瞼腫脹，眼結(jié)膜內(nèi)和鼻竇內(nèi)有許多灰白色干酪樣物或灰白色膿性

3、分泌物，眼結(jié)膜和鼻竇粘膜充血、潰瘍等為主要特征的眼炎和鼻竇炎。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查，禽波氏桿菌病的發(fā)病率約為30％，死亡率在5％～30％，患病雞群的雞多數(shù)生長遲緩，飼料報酬低，給養(yǎng)雞業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究從發(fā)病雞場送檢的不同日齡和不同雞舍的雞胚中共分離到2株疑似致病菌，根據(jù)其形態(tài)學(xué)特性、培養(yǎng)特性、生化特性、血清學(xué)特性的結(jié)果，初步表明該細(xì)菌為能運(yùn)動、無芽胞的革蘭氏陰性小桿菌，即禽波氏桿菌。隨后參考GenBank中收錄的禽波氏桿菌基因序列設(shè)

4、計一對引物，其中設(shè)計EcoRⅠ、PstⅠ酶切位點(diǎn)，通過測序比對擴(kuò)增的23S
　　 rRNA基因序列的差異，最后將測序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行Blast分析比對，證明該菌株與NCBI中收錄的B.avium167904距離最近，同源性達(dá)92.4％。
　　 第二部分禽波氏桿菌單因子血清的制備及血清型初步鑒定
　　 本試驗(yàn)利用波氏桿菌的14個菌株分別制備相應(yīng)的全菌免疫原，然后免疫1Kg左右的健康家兔，最后采血制備

5、抗血清。分別對14個抗血清進(jìn)行效價測定均集中在1:4800～1:3200。用已制備好的相應(yīng)抗原與抗血清進(jìn)行交叉吸收試驗(yàn)，得到Ⅰ型和Ⅱ型兩種單因子血清，兩種單因子血清的效價分別為1:800和1:1024。不同血清型的單因子血清不與其他血清型菌株發(fā)生凝集。利用試驗(yàn)獲得的兩種單因子血清對實(shí)驗(yàn)室已獲得的禽波氏桿菌分離株進(jìn)行血清型的鑒定，證明分離到的P1～P10、P15、LL、XT菌株血清型均為血清Ⅰ型，P11～P14的血清型則屬于Ⅱ型，這也說明