日本囊對蝦雌雄性腺差異表達基因的克隆與分析.pdf

1、日本囊對蝦(Marsupenaeus japonicus)系甲殼動物，是我國沿海重要的經(jīng)濟養(yǎng)殖種類。其性別控制是水產(chǎn)遺傳育種的研究熱點。目前人們對包括蝦蟹在內(nèi)的甲殼動物性腺差異的分子機制仍認識有限，因此研究對蝦精巢、卵巢差異表達基因具有重要的理論意義和應(yīng)用前景。
　　 退火控制引物技術(shù)(annealing control primer)是一種在mRNA 差異顯示PCR(mRNA differential display PCR)

2、基礎(chǔ)上發(fā)展起來的克隆差異表達基因的新方法。本研究利用ACP技術(shù)，選擇20對ACP隨機引物分別對日本囊對蝦精巢和卵巢cDNA進行擴增，獲得8個差異基因。其中凝血酶敏感蛋白基因(thrombospondin)和皮質(zhì)棒蛋白基因(cortical rod protein-2)是卵巢顯著表達的基因。增殖細胞核抗原基因(proliferating cell nuclear antigen)和泛素綴合酶基因(ubiquitin-conjugating

3、 enzyme 2r)在精巢表達量高于卵巢的基因。其余基因為未知基因。
　　 RACE 技術(shù)獲得增殖細胞抗原基因和泛素綴合酶基因的cDNA 序列全長，序列分析顯示增殖細胞抗原基因cDNA序列包括923個堿基，其中包括75 bp的5’端的非編碼區(qū)(5’untranslated region)。783bp的開放閱讀框(open reading frame)，65 bp的3’的非編碼區(qū)(3’untranslated region)(除

4、去polyA部分)，該開放閱讀框編碼260個氨基酸序列。泛素綴合酶基因cDNA序列全長為1477 bp，包括651 bp的5’的非編碼區(qū)，85 bp的3’的非編碼區(qū)(除去polyA部分)，以及一個編碼241個氨基酸的開放閱讀框。
　　 熒光定量PCR分析證實了ACP技術(shù)所獲得的結(jié)果并進一步發(fā)現(xiàn)了各個差異基因在精巢和卵巢的不同發(fā)育階段的表達特點，各個基因在精巢和卵巢的發(fā)育過程中變化顯著，說明這些基因在性腺發(fā)育過程中起著重要的作用。