草莓‘紅頰’快速繁殖及遺傳轉(zhuǎn)化體系研究與應(yīng)用.pdf

1、本試驗(yàn)以草莓栽培品種‘紅頰’為試材,研究了表面消毒劑、處理時(shí)間、外植體生長發(fā)育時(shí)期對(duì)莖尖存活率的影響,及初代培養(yǎng)基、激素、pH、糖濃度及氮源等因素對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響,并對(duì)脫毒苗果實(shí)的可溶性糖含量和氨基酸含量進(jìn)行測(cè)定；并以此為基礎(chǔ),進(jìn)行了葉片、葉柄、短縮莖等離體再生體系研究,探討了基本培養(yǎng)基、暗培養(yǎng)、放置方式、葉齡對(duì)葉片離體再生的影響,及激素組合對(duì)葉片、葉柄、短縮莖離體再生的影響,建立了高效再生體系。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)AtCYP2基因轉(zhuǎn)化‘紅

2、頰’,獲得了19個(gè)獨(dú)立轉(zhuǎn)化子,經(jīng)PCR檢測(cè),獲得4個(gè)陽性獨(dú)立轉(zhuǎn)化子。
　　 1‘紅頰’莖尖快繁體系的建立
　　 (1)通過對(duì)匍匐莖莖尖表面消毒效果的研究發(fā)現(xiàn)：以未展開的匍匐莖莖尖作為外植體、0.1％HgCl2附加2％吐溫-100溶液處理8 min、以MS或MS+0.5 mg/L,6-BA為初代培養(yǎng)基,外植體污染及褐化水平最低,成苗率最高,達(dá)87％。
　　 (2)繼代增殖中6-BA濃度0.3 mg/L和0.5 mg

3、/L交替使用。此外,0.5 mg/L6.BA和0.3 mg/L GA組合培養(yǎng),具有壯苗作用；而1.0mg/L6-BA和0.3 mg/L IBA組合培養(yǎng)基上能夠生產(chǎn)匍匐莖。
　　 (3)在1/2MS+0.01 mg/L NAA+20 g/t,蔗糖(pH6.0±0.2)培養(yǎng)基上,生根率最高,植株平均根數(shù)亦最高,并且根系粗壯,長勢(shì)良好。
　　 (4)對(duì)‘紅頰’進(jìn)行增殖培養(yǎng)時(shí),保持氮素總量不變,NH4NO3的氮素可分別用同形式的

4、KNO3和(NH4)2SO4等摩爾當(dāng)量替代,不影響植株正常生長。與繼代增殖相比,氮素存在形式對(duì)‘紅頰’組培苗生根的影響較小。
　　 (5)‘紅頰’脫毒苗第一年果實(shí)的可溶性糖含量和游離氨基酸含量均比非脫毒苗果實(shí)的含量高。
　　 2‘紅頰’葉片、葉柄、短縮莖再生體系的建立
　　 (1)通過對(duì)葉片離體再生的研究,發(fā)現(xiàn)’紅頰’葉片離體再生的最佳誘導(dǎo)方式為：以近心葉第二、三片葉子為材料,遠(yuǎn)軸面(背面)接觸培養(yǎng)基MS+2.0

5、mg/LTDZ+0.1 mg/L NAA,暗培養(yǎng)7d,愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)91.4％。
　　 (2)葉柄的不定芽最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L IAA,不定芽誘導(dǎo)率為77.8％。
　　 (3)短縮莖離體再生的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L6-BA+0.05 mg/LNAA,愈傷組織誘導(dǎo)率為71.9％,愈傷組織分化率為68.7％。
　　 3‘紅頰’遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立