水稻OsVDAC5與OsV5IPs相互作用的驗證.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、電壓依賴性陰離子通道(voltage-dependent anion channels, VDACs)是結(jié)構(gòu)上高度保守的孔狀蛋白，在能量代謝、細(xì)胞凋亡、物質(zhì)運輸和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起著重要的作用。本實驗室前期已經(jīng)在水稻中鑒定出8個VDAC基因(大多數(shù)的功能尚未報道)，并且利用膜蛋白酵母雙雜交技術(shù)篩選出了與OsVDAC5相互作用的7個蛋白質(zhì)(OsV5IP1-7)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴將7個互作蛋白基因全長cDNA序列克隆到pPR

2、3-N載體上，與pBT3-SUC-OsVDAC5(1-75aa)共同轉(zhuǎn)化酵母NMY51菌株。從SD-2固體培養(yǎng)基中挑取單克隆于YPAD液體培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)，當(dāng)OD546約為0.6-0.8時，將菌液稀釋10倍、10-2倍、10-3倍后取2.5μL在SD-2、SD-4和SD-4(3-AT)固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。結(jié)果表明：篩選出的7個OsV5IP同OsVDAC5(1-75aa)蛋白都有相互作用。⑵根據(jù)蛋白質(zhì)序列分析，將OsV5IP1和OsV5IP

3、2氨基酸序列各分為兩部分，即OsV5IP1(1-239aa)、OsV5IP1(240-364aa)、OsV5IP2(1-90aa)和OsV5IP2(91-210 aa)，將這四部分片段分別克隆于原核表達(dá)載體 pET-32a中進(jìn)行體外蛋白的表達(dá)和 pull-down實驗。結(jié)果表明：OsV5IP1(1-239aa)同OsVDAC5(1-75aa)蛋白發(fā)生了相互作用，其余三個蛋白同OsVDAC5(1-75aa)在體外未檢測到相互作用。⑶通過G

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