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1、目的:以前期研究中,利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選出的與Reticulon3(RTN3)相互作用的蛋白為基礎(chǔ),選取Fibulin5(FBLN5)作為進(jìn)一步研究的對(duì)象,從基因水平,蛋白質(zhì)水平和細(xì)胞水平,對(duì)RTN3能否與FBLN5相互作用進(jìn)行預(yù)測(cè)和驗(yàn)證。相關(guān)研究為探究RTN3蛋白除凋亡功能之外的其他功能提供線索。
方法:(1)通過(guò)生物信息學(xué)的方法,對(duì)RTN3蛋白基因序列進(jìn)行分析,對(duì)RTN3基因啟動(dòng)子序列和轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行預(yù)測(cè);(2)通過(guò)對(duì)RT
2、N3和FBLN5蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬和分析,對(duì)它們的相互作用可能性進(jìn)行預(yù)測(cè);(3)利用免疫共沉淀技術(shù),從細(xì)胞水平證實(shí)RTN3與FBLN5能否發(fā)生相互作用;(4)依據(jù)生物信息學(xué)的分析結(jié)果,構(gòu)建RTN3蛋白部分片段缺失的載體,為RTN3功能研究提供條件。
結(jié)果:(1)通過(guò)基因序列分析,預(yù)測(cè)RTN3啟動(dòng)子序列位于47-187bp附近,轉(zhuǎn)錄因子為GATA-1;(2)通過(guò)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè),RTN3與FBLN5存在相互作用結(jié)構(gòu);(3)通過(guò)免疫共
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