低溫馴化下黃粉蟲(chóng)抗凍蛋白基因應(yīng)激表達(dá).pdf

1、黃粉蟲(chóng)在遇到低溫時(shí)會(huì)增高抗凍蛋白的表達(dá)，然而抗凍蛋白是一個(gè)基因家族，其中蛋白的長(zhǎng)度和結(jié)構(gòu)存在著差異。在生物體的適應(yīng)過(guò)程中，哪種抗凍蛋白的基因的表達(dá)量更高，尚不清楚。本文對(duì)黃粉蟲(chóng)抗凍蛋白基因家族，保守序列長(zhǎng)度存在差異的基因進(jìn)行研究，選取了黃粉蟲(chóng)抗凍蛋白基因家族中三個(gè)具有代表性的基因，NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)編號(hào)分別為：AF160497，AF160496，AF160494，進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量PCR，測(cè)定其基因相對(duì)表達(dá)水平。處理如下,4℃下馴化4天、8

2、天、16天、24后，對(duì)上述三個(gè)基因的表達(dá)量進(jìn)行了測(cè)定，同時(shí)還進(jìn)行了4℃下低溫馴化4天、8天、16天、24天，經(jīng)-11℃處理后，黃粉蟲(chóng)死亡率的統(tǒng)計(jì)。此外還進(jìn)行了抗凍蛋白的在真核細(xì)胞SF-9中的表達(dá)試驗(yàn)。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　　 ⑴隨著黃粉蟲(chóng)在4℃下的處理時(shí)間延長(zhǎng)，經(jīng)-11℃處理后，黃粉蟲(chóng)的死亡率呈現(xiàn)下降的趨勢(shì),4天、8天、16天都有明顯的降低,24天處理樣本與16天處理樣本的差異不顯著。
　　 ⑵黃粉蟲(chóng)4℃下馴化4天

3、、8天、16天，分別取樣對(duì)基因Af160497進(jìn)行RTPCR?；駻f160497的表達(dá)量，在4天取樣點(diǎn)表達(dá)量劇烈上升，而到了8天左右表達(dá)量則低于4天，經(jīng)過(guò)16天處理后基因的表達(dá)量繼續(xù)增加，總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。
　　 ⑶黃粉蟲(chóng)4℃下馴化4天、8天、16天，分別取樣對(duì)基因AF160496進(jìn)行RTPCR。基因AF160496的表達(dá)量，在4天取樣點(diǎn)有了較大提升，在8天和16天取樣現(xiàn)點(diǎn)，它的表達(dá)量持續(xù)走低。
　　 ⑷黃粉蟲(chóng)4℃下馴

4、化4天、8天、16天，分別取樣對(duì)基因AF160494進(jìn)行RTPCR。基因AF160494的表達(dá)量，在4天的取樣點(diǎn)也是有了很大提升，在8天取樣的點(diǎn)表現(xiàn)出與基因Af160497表達(dá)量降低，在16天取樣點(diǎn)，該基因又恢復(fù)到4天取樣點(diǎn)的表達(dá)水平。
　　 ⑸通過(guò)對(duì)三個(gè)基因的對(duì)比，基因AF160494的整體表達(dá)量高于其他兩個(gè)處于主導(dǎo)地位，AF160496、AF160497基因表達(dá)水平相當(dāng)，顯著低于基因AF160494的表達(dá)水平。
　　

5、 ⑹檢測(cè)了冷馴化對(duì)低溫死亡率的效應(yīng)和對(duì)不同類(lèi)型的抗凍蛋白家族成員基因表達(dá)量的影響。結(jié)果表明，冷馴化可以顯著降低黃粉蟲(chóng)幼蟲(chóng)的低溫死亡率和提高不同類(lèi)型抗凍蛋白基因的表達(dá)量。其中，長(zhǎng)的抗凍蛋白和低溫死亡率的相關(guān)關(guān)系最為明顯。說(shuō)明不同的抗凍蛋白家族成員的功能有明顯的分化，為進(jìn)一步理解抗凍蛋白的活性和利用抗凍蛋白提供了新的認(rèn)識(shí)。
　　 ⑺真核SF-9細(xì)胞表達(dá)抗凍蛋白過(guò)程中，完成了載體構(gòu)建及桿粒的形成，并表達(dá)出一定蛋白，但得到的蛋白分子量大