抗凍蛋白基因?qū)ι綏畹戎参镞z傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文抗凍蛋白基因?qū)ι綏畹戎参镞z傳轉(zhuǎn)化的研究姓名：李春霞申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：祖元剛;柳參奎20030601A B S T R A C TC 1 0 B i n g ag e n e f o ra n t i f r e e z ep r e t e i na n di n t r o d u e i n gi t i n t op o p l a ro f f e r s a u r ] i q u

2、 e o p p o r t u n i t Yf o rf r e e z e c o d t r 0 1 ．P r o d u c t i o no f r e e a l c i t r a n t f r e e z ep o p l a r s p e e i e s W O N l d t h u s b e e e o n o m i c a l l Ya t t r a c t i v e ．F i r s t ，a n

3、 t i f r e e z ep r o t e i n ( A F P ) g e n ew a s is o I a t e df r o mD a u c u sc a r e t a b y R T —P C Ra n d c o n s t r u e t e d i t i n t o t h e p l a n t e x p r e s s i o nv e c t o r P B l l 2 1 ，w h i c h

4、 t h e n w a s t r a n s f o r m e d i n t o A g r o b a c t e r i u mt u m e f a c i e n E H A l 0 5 b y e l e c t r o p o r a t i o n ．T r a n s g e n i c t o b a c o o w e r eo b t a i n e d b y A g r o b a o t e r i

5、u m —m e d i a t e d t r a n s f e r m a t i o n s y s t e m f r o mt o b a e c ol e a f d i s c s ．T h e s ep r o v e d t h a t t h e p l a n te x p r e s s i o n v e c t o rc a i l e x p r e s s e de f f e c t u a l l

6、Yi n p l a n t s ．T h i sw i l l p r e p a r ef o rp l a n t st r a n s f o r m a t i o n a n dp r o d u c t i o n o f r e c a l c i t r a n tf r e e z e p l a n t s ．A n dt h i s w i l1 p r e p a r e f o r s t u d y i n

7、 g o n t h e e x p r e s s i o n a n df u n c t i o r ] o fA F P g e n e ．T h er e s e a r c he s t a b l i s h e dh i g h ——f r e q u e n c yr e g e n e r a t i o n s y s t e mo f P o p u ] u s ．如v i d i a n aD o d e ．A

8、 p p l vs u c h f a c t o r sa s h o r m o n ep o t e n c ya n d p r o p o r t i o n i n g ，b a s a lm e d i a ，a g a r c o n c e N t r a t i o n ，S U C r o s e p e t e n c yi n o r t h o g o r ] a 1 t e s t ．T h er e s

9、u l t ss h o w e d t h a tW P + 6 ～B A 1 ．O m g ／L +N A A 0 ．0 5 m g ／L + 0 ．8 ％a g a r + 2 ．O ％s l J e r o s ew a st h eb e s t r e g e n e r a t i o nm e d i u m ．w h i c hl e a f d i f f e r e n t i a t i o nr a t e i

10、 s o v e r 9 5 ％．I n o r d e r t o d e c i d e a r e a s o n a h l e s e l e c t i v e p r e s s u r e f o rt r a n s f o r m a t i o n ，t h e r e s e a r c ht e s t e dt h es e a s i t i v i t y o f t h ee x p l a n t s

11、t o K a n a m y c i n ．T h ec r i t i c a l c o n e e n t r a t i o n o f k a n a m y c i nt o t h e c e l lp o l a r i z a t io ni s 5 0 m g ／L ，a n d 4 0 m g ／Ld u r i n gt r a n s g e n i cp l a n t s r o o t i n g ．O

12、 n t h e h a s i s o f e s t a b l i s h m e n t o f p o p l a r 1 e a fh i g h —f r e q u e n c yr e g e n e r a t i o ns y s t e m ，c a r r y i n go i lt h es t u d y o f p o p l a r t r a n s f o r m a t i o n ，m e d

13、i a t e d b y A g r o b a c t e r i u m t u m e f a c l “ e n s ．T h e e f f i c i e n t s y s t e m o ft r a n s f o r m a t i o n v i a A g r o b a e t e r l ' u m —m e d i a t e d i s e s t a b l i s h e d b yr e

14、g u l a t i n gt h eC F H C i a lf a c t o r s ：S t e r i l i z e dl e a v e sw e r ee a t i n t o l c m×0 ．5 e m ，a n d w e r ep r e c u l t u r e d f o r 2 - - 3 de l lW P M r e g e n e r a t i o n m e d i a ，b a