小麥E3基因的克隆及其在葉銹菌侵染過(guò)程中的表達(dá)分析.pdf

1、本項(xiàng)研究工作是在前期工作的基礎(chǔ)上開(kāi)展的。本實(shí)驗(yàn)室閻愛(ài)華等[1]構(gòu)建了葉銹菌小種366侵染小麥近等基因系TcLr19早期不同時(shí)間點(diǎn)的SSH文庫(kù)。從中篩選出的TaE3 EST在葉銹菌侵染后16h高量表達(dá)。已有研究表明,在高溫或低溫脅迫下,植物某些蛋白會(huì)發(fā)生錯(cuò)誤折疊,如果這些蛋白積累就易引起病變。具有E3活性的AtCHIP蛋白就是通過(guò)調(diào)控Hsp70、Hsp90蛋白的表達(dá),重疊修復(fù)或降解某些異常蛋白,減少了環(huán)境脅迫對(duì)植株的損害[2]。本試驗(yàn)以小

2、麥近等基因系TcLr19和葉銹菌小種366為材料,利用RT-PCR技術(shù)克隆得到TaE3基因的全長(zhǎng),通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blotting技術(shù)檢測(cè)小麥被葉銹菌侵染后不同時(shí)間點(diǎn)的TaE3表達(dá)特征,并通過(guò)構(gòu)建真核表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化技術(shù)轉(zhuǎn)化擬南芥,得到過(guò)表達(dá)TaE3基因的擬南芥純合體植株。獲得的主要結(jié)果如下:
　　 1.利用RT-PCR技術(shù)從小麥幼苗葉片中克隆獲得了TaE3基因的全長(zhǎng)。
　　 2.構(gòu)建了原

3、核表達(dá)載體,獲得大量TaE3融合表達(dá)蛋白,通過(guò)免疫新西蘭兔,獲得高效價(jià)的兔抗血清,并證明該血清與TaE3融合蛋白呈特異結(jié)合。
　　 3.通過(guò)qRT-PCR和Western Blotting技術(shù)檢測(cè)了TaE3基因在小麥被葉銹菌侵染后不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量變化。結(jié)果表明,該基因在RNA水平的表達(dá)量在8 h之前幾乎沒(méi)有變化,但在16 h表達(dá)量很高且達(dá)到峰值；在蛋白水平的表達(dá)量在8 h開(kāi)始增加,16 h表達(dá)量最高,而在24 h又有所回落,4