蛹蟲(chóng)草SU5-01胞外多糖與胞內(nèi)鍺多糖的提取及其抗氧化活性.pdf

1、蟲(chóng)草屬(Cordyceps)在分類學(xué)上屬于子囊菌亞門(mén)(Ascomycotina)核菌綱(Pyrenomycetes)球殼菌目(Sphariales)麥角菌科(Claviciptiaceae)。蛹蟲(chóng)草(Cordyceps militaris)，又名北冬蟲(chóng)夏草，富含多糖、蟲(chóng)草素、微量元素及多種酶復(fù)合物，其中多糖具有增強(qiáng)免疫力、抗癌、抗氧化等功效。蛹蟲(chóng)草與冬蟲(chóng)夏草有相同或相似的藥用價(jià)值，是冬蟲(chóng)夏草較好的替代品，有很好的開(kāi)發(fā)前景。鍺元素尚未被證

2、實(shí)是人體必需元素，但是研究表明有機(jī)鍺化合物具有很好的抗腫瘤、消炎和殺菌等生物學(xué)功能。利用蛹蟲(chóng)草富集鍺元素所得到的鍺多糖兼有多糖和有機(jī)鍺的功效，且更易被有機(jī)體吸收和利用。
　　 本課題利用單因子和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)蛹蟲(chóng)草(C.militaris SU5-01)液體發(fā)酵產(chǎn)鍺多糖的培養(yǎng)基配方進(jìn)行了優(yōu)化，通過(guò)Plackett-Burman(PB)及response surface methodology(RSM)優(yōu)化獲得了胞外多糖(exop

3、olysaccharide，EPS)及胞內(nèi)鍺多糖(intracellular germanium polysaccharide，IGPS)的最佳提取條件，同時(shí)檢測(cè)了EPS及IGPS的體外與體內(nèi)抗氧化活性，并對(duì)IGPS組分進(jìn)行了初步分離。
　　 (1)產(chǎn)鍺多糖培養(yǎng)基配方優(yōu)化
　　 通過(guò)單因子和正交試驗(yàn)，以蛹蟲(chóng)草富鍺菌絲體干重(drycellweight，DCW)和IGPS得率為指標(biāo)，確定產(chǎn)蛹蟲(chóng)草鍺多糖的最佳液體培養(yǎng)基配方為

4、葡萄糖30g/L，酵母粉6g/L，鍺濃度60mg/L，KH2PO41.5g/L，MgSO4·7H2O1g/L，pH6.5。在此條件下，蛹蟲(chóng)草富鍺菌絲體干重為19g/L，IGPS得率為8.11％。
　　 (2)EPS及IGPS的提取優(yōu)化
　　 通過(guò)PB試驗(yàn)及RSM優(yōu)化，得到EPS的最佳提取條件為：乙醇濃度94.43％、pH7.32、濃縮倍數(shù)3.57，在此條件下，EPS提取量的理論值達(dá)到2.94g/L。IGPS的最佳提取條件

5、為：提取溫度89.92℃，乙醇濃度93.07％，提取次數(shù)2.92，多糖得率5.09％。IGPS經(jīng)過(guò)CelluloseDEAE-52柱層析，得到三種組分，分別命名為IGPS-1，IGPS-2，IGPS-3。
　　 (3)EPS及IGPS的體外抗氧化
　　 以超氧陰離子(O2-·)清除率、DPPH清除率和還原力大小為指標(biāo)，對(duì)EPS及IGPS的體外抗氧化能力進(jìn)行了初步探討。結(jié)果表明，EPS及IGPS具有明顯清除O2-·、DPP

6、H自由基的作用，并具有一定的還原力，且呈現(xiàn)量效關(guān)系。
　　 EPS在2g/L時(shí)，還原力為0.44，比陽(yáng)性對(duì)照BHT高29.41％；對(duì)O2-·和DPPH自由基的清除率分別為82.61％、50.56％。EPS對(duì)于O2-·和DPPH的半數(shù)抑制濃度(EC50)分別為0.8g/L、2g/L。IGPS對(duì)于DPPH自由基的半數(shù)抑制濃度(EC50)為0.18g/L；在濃度為1.0g/L時(shí)，IGPS的還原力比IPS高36.89％。
　　

7、(4)多糖體內(nèi)抗氧化
　　 以小鼠組織及全血中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidsade，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量為指標(biāo)，初步探究了EPS和IGPS的體內(nèi)抗氧化活性。結(jié)果表明，EPS和IGPS均能提高小鼠組織及全血中SOD、CAT和GSH-Px活性，并