古尼蟲(chóng)草胞內(nèi)多糖的分離純化及其生物活性的研究.pdf

1、目的：古尼蟲(chóng)草具有抗疲勞、抗腫瘤、防治心律失常、改善造血功能、抗氧化、抗抑郁和降血糖等多種藥理學(xué)活性。本文優(yōu)化古尼蟲(chóng)草多糖提取工藝，通過(guò)分離純化以期得到純度較高的古尼蟲(chóng)草胞內(nèi)多糖組分并探討其抗疲勞及免疫調(diào)節(jié)活性機(jī)理。
　　方法：采用超聲提取法，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，分別采用響應(yīng)面法、ANN-GA法優(yōu)化胞內(nèi)多糖提取工藝；利用Sevag法除蛋白質(zhì)、乙醇沉淀法得到胞內(nèi)粗多糖，通過(guò)離子交換層析法和凝膠色譜層析法對(duì)粗多糖進(jìn)行分離純化及高效液

2、相色譜法、紫外光譜掃描和傅里葉近紅外光譜掃描對(duì)其結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行初步探討；選取昆明小鼠，分別設(shè)空白組、參芪顆粒對(duì)照組，CG1高/中/低劑量組，CG2高/中/低劑量組，連續(xù)給藥30天，比較各組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間和游泳后血清中尿素氮、肝臟中肝糖原的含量，探討CG1和CG2體內(nèi)抗疲勞活性；采用環(huán)磷酰胺（CTX）建立小鼠免疫抑制模型，以胸腺素α1為陽(yáng)性對(duì)照藥，對(duì)小鼠自然殺傷細(xì)胞（NK）的殺傷活性和T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化活性進(jìn)行研究，并通過(guò)ELISA法測(cè)定小鼠

3、血漿中免疫相關(guān)細(xì)胞因子的水平，探討多糖（CG1和CG2）對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響。
　　結(jié)果：從深層發(fā)酵獲的菌絲體中提取古尼蟲(chóng)草多糖最優(yōu)工藝參數(shù)：超聲功率為323 W；超聲時(shí)間456 s；固液比1:83。通過(guò)驗(yàn)證試驗(yàn)，多糖提取率為1.90％，與預(yù)測(cè)值1.88%誤差為1%；獲得CG1和CG2兩種純化糖，且二者并不是單一多糖，還含有其他種類雜多糖，但以一種多糖為主。同時(shí)結(jié)果表明，CG1和CG2能夠顯著延長(zhǎng)小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間，降低疲勞血清尿

4、素氮含量，增加肝糖原含量；CG1可以顯著的提升NK細(xì)胞殺傷活性和T淋巴細(xì)胞的增殖，緩解由于環(huán)磷酰胺作用引起的體重和臟器指數(shù)下降、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-α、IFN-γ、TNF-α、NF-KappaB水平的降低，而CG2通過(guò)此實(shí)驗(yàn)暫未發(fā)現(xiàn)有此類功效。
　　結(jié)論：本文通過(guò)ANN-GA法得到的最佳提取工藝，對(duì)古尼蟲(chóng)草菌絲體胞內(nèi)多糖進(jìn)行了分離純化，得到兩種主要多糖分別是CG1和CG2。CG1和CG2均能夠緩解小