熊果酸、viili胞外多糖及黃芪多糖的抗炎抗氧化研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌(primarycarcinomaoftheliver)，是我國最常見的惡性腫瘤之一，僅次于胃癌、食道癌，我國發(fā)病人數(shù)約占全球半數(shù)以上。研究發(fā)現(xiàn)環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)，在肝癌細胞中存在著高表達，且在肝癌的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。熊果酸(ursolicacid，UA)，viili胞外多糖(exopolysaccharides，EPS)和黃芪多糖（Astragaluspolysacharin

2、，APS）均有抗腫瘤的作用，但其確切的作用機制尚未明確，因此本實驗旨在研究熊果酸，viili胞外多糖，黃芪多糖及其協(xié)同組的抗炎抗氧化作用。
　　本實驗首先通過總還原力的測定以及對羥自由基、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的清除檢測樣品的抗氧化能力。其次以人肝癌細胞HepG2為實驗?zāi)Ｐ?，通過噻唑藍(MTT)法檢測樣品對HepG2細胞的抑制作用;電子掃描電鏡觀察細胞形態(tài)變化以及流式細胞儀(FCM)檢測細胞周期變化;采用超氧化物

3、歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒檢測細胞內(nèi)SOD活力和MDA含量的變化;實時熒光定量(RT-PCR)PCR和蛋白免疫印跡(Westernblot)檢測COX-2基因的表達，并用ELISA法檢測樣品對HepG2細胞內(nèi)COX-2濃度和PGE2的合成量的影響。
　　實驗表明熊果酸，viili胞外多糖，黃芪多糖及其協(xié)同組具有較強抗氧化力，清除羥自由基，DPPH自由基。樣品可以抑制HepG2細胞的增殖，且抑制作用呈濃度和時間的依賴關(guān)

4、系;5μg/mLUA，50μg/mLviiliEPS，50μg/mLAPS及協(xié)同組作用HepG2細胞后，細胞凋亡現(xiàn)象明顯，分析細胞周期特異性變化，細胞多數(shù)聚集在G1期;樣品對細胞內(nèi)SOD活力有降低現(xiàn)象，呈現(xiàn)出濃度依賴性;UA及協(xié)同組對MDA含量降低效果明顯，viiliEPS和APS作用后MDA含量高于空白對照組，但隨濃度增加時也呈現(xiàn)降低趨勢;RT-qPCR和Westernblot檢測到HepG2細胞內(nèi)的COX-2的表達有明顯的下調(diào)趨勢，

5、同時ELISA法檢測到HepG2細胞內(nèi)COX-2濃度和PGE2的合成量均有明顯的下降，其中5μg/mLUA，50μg/mLviiliEPS，50μg/mLAPS及協(xié)同組對COX-2表達和PGE2的合成比其他作用組的抑制效果明顯。
　　實驗結(jié)果表明UA，viiliEPS，APS及其協(xié)同組可以下調(diào)肝癌細胞中COX-2的表達，可能是通過調(diào)節(jié)由COX-2引發(fā)的內(nèi)部抗氧化途徑，創(chuàng)造一個潛在的超氧化環(huán)境來達到抑制肝癌細胞增殖的目的，并通過誘導(dǎo)