乳酸桿菌胞外多糖生成條件優(yōu)化及其抗炎、抗氧化作用.pdf

1、本試驗(yàn)旨在以鼠李糖乳酸桿菌(Lactobacillus rhamnosus GG, LGG)為代表,優(yōu)化乳酸桿菌胞外多糖(Exopolysaccharide, EPS)的提取和合成條件,解析不同乳酸桿菌胞外多糖的單糖組成及其對人工致敏體外培養(yǎng)腸上皮細(xì)胞的抗炎作用及抗氧化作用。
　　本論文采用單因素試驗(yàn)分別研究三氯乙酸濃度、乙醇添加量和乙醇沉淀時(shí)間對胞外多糖提取量的影響。利用單因素對碳源、葡萄糖濃度、培養(yǎng)基初始pH值、接種量、培養(yǎng)溫

2、度、培養(yǎng)時(shí)間等影響胞外多糖合成的條件進(jìn)行優(yōu)化;在此基礎(chǔ)上,選擇對EPS產(chǎn)量具有較大影響的培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基初始pH值、葡萄糖濃度作為正交試驗(yàn)因素,設(shè)計(jì)四因素三水平L9(34)正交試驗(yàn),優(yōu)化合成EPS的條件。采用RT-PCR法評價(jià)LGG和仔豬腸道來源乳酸桿菌ZJ610、ZJ614、ZJ616、ZJ617、ZJ621和ZJ623的EPS對脂多糖(LPS)致敏豬腸上皮細(xì)胞相關(guān)免疫因子(IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α)基因

3、轉(zhuǎn)錄水平影響;通過總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)這5個(gè)抗氧化指標(biāo),對不同乳酸桿菌所產(chǎn)EPS對LPS致敏IPEC細(xì)胞的抗氧化活性進(jìn)行評價(jià)。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化高效液相色譜(HPLC)法分析不同乳酸桿菌EPS的單糖組成,通過峰面積計(jì)算各種單糖的比值。
　　試驗(yàn)結(jié)果表明胞外多糖合成的最佳條件為:培養(yǎng)基中添

4、加20 g/L的葡萄糖、pH值為6.5,30℃培養(yǎng)20 h,在此條件下,胞外多糖的產(chǎn)量為230.2 mg/L。胞外多糖最佳提取條件為:用11％的三氯乙酸除蛋白,4倍體積95%的乙醇,沉淀24 h。LGG及6株待測乳酸桿菌EPS均能顯著降低LPS致敏IPEC的促炎細(xì)胞因子IL-6、IL-12和TNF-α水平(P<0.05),僅ZJ617及LGG的EPS顯著提高抗炎細(xì)胞因子IL-10的水平(P<0.05),顯示來源于ZJ617的EPS具有最

5、佳的免疫調(diào)節(jié)能力。ZJ623的EPS具有較強(qiáng)的抗氧化能力,它可以提高T-AOC、SOD活性,降低MDA含量,顯著提高CAT活性及GSH-Px活性(P<0.05)。唾液乳酸桿菌Lactobacillus salivarius ZJ610和 ZJ614的 EPS的甘露糖組成比例顯著低于羅伊氏乳酸桿菌 Lactobacillus reuteri ZJ616、ZJ617、ZJ621和ZJ623(P<0.05),而半乳糖、葡萄糖和半乳糖醛酸顯著高