清咽口含片濃縮純化工藝對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響

1、<p>　　清咽口含片濃縮純化工藝對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響</p><p>　　袁淑婧, 范玲, 周琴妹* </p><p>　　江蘇省中醫(yī)院，南京210029</p><p>　　摘要: 目的 實驗考察濃縮純化過程中影響乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的因素，優(yōu)選清咽口含片的醇沉工藝。方法 采用單因素考察與正交試驗相結(jié)合的方法，以白毛夏枯草中乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率及干

2、膏得率作為考察指標優(yōu)選醇沉工藝。結(jié)果 優(yōu)選的醇沉工藝為：藥液濃縮至相對密度1.13，加95%乙醇至乙醇濃度為70%，醇沉時藥液的溫度為60℃，冷處靜置24 h。結(jié)論 優(yōu)選的醇沉工藝簡單易行，適用于實際生產(chǎn)。</p><p>　　關(guān)鍵詞: 清咽口含片；正交試驗；醇沉工藝；乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率</p><p>　　The Effect of Concentration and Purific

3、ation Technology of Qingyan Buccal Tablets on the transferring rate of Acetylharpagide </p><p>　　Yuan Shujing, Fan Ling, Zhou Qinmei*1</p><p>　　(Jiangsu Provincial Hospital of TCM Nanjing 210029

4、)</p><p>　　ABSTRACT: Objective To optimize the technology of alcohol-precipitating of Qingyan buccal tablets by studying the affecting factors of the transferring rate of Acetylharpagide in Concentration and

5、 Purification process of Qingyan Buccal Tablets. Methods A combined method of orthogonal design and single-factor study was used to optimize alcohol-precipitating process with the indices of and the rate of dried extract

6、. Results The optimal conditions were as follows：concentrating water extract until i</p><p>　　KEY WORDS: Qinyan buccal tablets; orthogonal design; alcohol-precipitating technique; the transferring rate of Ac

7、etylharpagide</p><p>　　清咽口含片來源于江蘇省中醫(yī)院臨床經(jīng)驗方，由白毛夏枯草、射干、玄參等六味中藥組成，根據(jù)本制劑組成成分的性質(zhì)，對射干飲片用乙醇提取[1]，而其他五味飲片用水提取。由于在水提過程中，飲片中的一些無效成分如多糖、油脂、脂溶性色素等也隨同有效成分一起溶出，為了保證制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性，需要進行醇沉工藝。本試驗先單因素考察醇沉藥液的溫度、醇沉藥液的相對密度、醇沉濃度等對白毛夏枯草

8、中乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響，再結(jié)合正交試驗選出最佳醇沉工藝。</p><p><b>　　1 材料</b></p><p>　　1.1 儀器與設(shè)備 Waters e2695型高效液相色譜儀，2998PDA檢測器（美國Waters公司）；BP-211D型電子分析天平（德國賽多利斯公司）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；101-1A型數(shù)顯電熱鼓風干燥箱（上海滬

9、南科學儀器聯(lián)營廠）。</p><p>　　1.2試藥 白毛夏枯草購于安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司,經(jīng)江蘇省中醫(yī)院藥學部陳曉斌主任中藥師鑒定為唇形科植物筋骨草屬金瘡小草Ajuga decumbensThunb.的干燥全草。</p><p>　　其它飲片均購于安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司，均符合2010版《中華人民共和國藥典》（一部）要求；</p><p>　　乙酰哈巴苷

10、對照品購自南京澤朗醫(yī)藥有限公司（批號：ZL20110303YX，含量98%）；</p><p>　　甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。</p><p><b>　　2 方法和結(jié)果</b></p><p>　　2.1乙酰哈巴苷含量測定</p><p>　　2.1.1色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 按照中國藥典2

11、010版中筋骨草中乙酰哈巴苷檢測方法[2]，色譜柱： Hedera-ODS-2 C18柱(250 mm × 4.6 mm, 5 um)；以乙腈-水(12：88)為流動相；檢測波長為207nm。流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃。</p><p>　　2.1.2對照品溶液的制備 精密稱取乙酰哈巴苷對照品9.10 mg，置于25 mL的容量瓶中，甲醇定容；精密量取1 mL置于5 mL的量瓶中，甲醇定容，

12、搖勻即得(乙酰哈巴苷含量0.0728mg/mL)。</p><p>　　2.1.3供試品溶液的制備 按處方比例稱取白毛夏枯草等飲片315g，按水提最佳工藝，所得提取液平均分為9份，分別按照因素水平表和正交實驗表，濃縮至不同程度，冷卻，快速攪拌下緩慢加入95% 乙醇至不同濃度，冷處靜置24 h，過濾。精密量取上述水提醇沉液2mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，即得。</p><p>　

13、　2.1.4 陰性溶液的制備 按處方制備工藝制成缺白毛夏枯草的陰性供試品，按供試品溶液的制備方法項下方法制得陰性對照溶液。</p><p>　　2.1.5專屬性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各 10 μL，注入液相色譜儀。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上有相同保留時間的色譜峰，陰性試驗無干擾，證明本方法可行[3]，見圖 1。</p><p>　　1　白毛

14、夏枯草片中乙酰哈巴苷的HPLC圖</p><p>　　Fig 1　HPLC chromatogram of acetylharpagide in Baimao Xiakucao Pian</p><p>　　A.對照品(reference); B.供試品(sample); C.陰性樣品; 1.乙酰哈巴苷(acetylharpagide)</p><p>　　2.1.

15、6標準曲線繪制 精密吸取上述對照品溶液3、5、10、15、25、35 μL進樣，測定峰面積值，以乙酰哈巴苷的進樣量(X，μg)對其峰面積值（Y）進行線性回歸，回歸方程為：Y=506529X +20502，r=0.9999，結(jié)果表明：在0. 2184~2.548μg范圍內(nèi)，峰面積值與乙酰哈巴苷進樣量有良好的線性關(guān)系。</p><p>　　2.1.7 精密度試驗 精密吸取對照品溶液，按2.1.1的色譜條件下連續(xù)進樣

16、6次，乙酰哈巴苷對照品峰面積的RSD為0.84%，表明儀器精密度良好[4]。</p><p>　　2.1.8 重復性試驗 取同一樣品（20110903）6份，按2.1.1的色譜條件下方法測定，結(jié)果乙酰哈巴苷的平均質(zhì)量濃度分別為2.34g·L－1，RSD 分別為0. 63%，說明本方法的重復性良好[4]。</p><p>　　2.1.9 穩(wěn)定性試驗 取上述樣品在2,4,8,12,2

17、4h分別測定，結(jié)果24h內(nèi)乙酰哈巴苷的平均質(zhì)量濃度為2.34g·L－1，RSD分別為0.95%，說明被測樣品在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好[4]。</p><p>　　2.1.6含量測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定醇沉液中乙酰哈巴苷含量，計算其轉(zhuǎn)移率。</p><p>　　2.2 干膏得率測定 精密量取上述醇沉液2 mL，置干燥恒重的蒸發(fā)皿

18、中，水浴蒸干，105 ℃烘箱中烘至恒重，取出，迅速置干燥器中冷卻30 min，精密稱定，計算干膏得率。</p><p>　　2.3 濃縮純化因素對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響</p><p>　　2.3.1醇沉時藥液的相對密度對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響</p><p>　　精密量取一定體積的水提液，分別濃縮至相對密度1.06，1.13，1.20，緩緩加入95%乙醇，邊加邊攪

19、拌至含醇量70%，冷處靜置24h，濾過。按含量測定方法制備供試品，測定乙酰哈巴苷含量，并計算轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見表1。 </p><p>　　表1 浸膏相對密度對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率及除雜率的影響</p><p>　　表1可知，隨著浸膏相對密度增大，乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率依次升高，除雜率逐漸升高。結(jié)合實際生產(chǎn)條件和成本，浸膏濃縮至相對密度為1.10~1.15即可，有效成分轉(zhuǎn)移率較高

20、，除雜率達到要求，且乙醇消耗量也較小。</p><p>　　2.3.2 醇沉濃度對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響</p><p>　　量取一定體積的提取液，濃縮至相對密度為1.15左右的浸膏，分別加入95%乙醇至含醇量為50%、60%、70%、80%，冷處靜置24h，濾過。按含量測定方法制備供試品，測定麥冬皂苷D含量，并計算轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表2。</p><p>　　表2醇沉

21、濃度對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響</p><p>　　由表2可知，隨著醇沉濃度增加，醇沉濃度對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響和除雜率逐漸增高。含醇量達70%時，乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率最高，除雜率亦較高，故醇沉至含醇量70%即可。 </p><p>　　2.3.3醇沉時藥液的溫度對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響</p><p>　　量取一定體積的藥液，濃縮至相對密度為1.15（60℃測）左右，

22、分成三分，分別置于40℃、60℃、80℃水浴中，緩緩加入95%乙醇，邊加邊攪拌至含醇量70%，冷處靜置24h，濾過。按含量測定方法制備供試品，測定乙酰哈巴苷含量，并計算轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見表3</p><p>　　表3 藥液的溫度對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率的影響</p><p>　　由表3可知，隨著藥液溫度為60℃時，乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率最高，但醇沉時藥液的溫度對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率影響不大。</p&

23、gt;<p>　　2.4純化工藝的正交設(shè)計</p><p>　　綜合分析以上三個實驗結(jié)果，得出優(yōu)選工藝條件為A2B3C2，因此擬定醇沉的最佳工藝條件為合并濾液濃縮至相對密度為1. 13，加乙醇使含醇量達70%，醇沉時藥液的溫度為60℃</p><p>　　2.5醇沉最佳工藝驗證</p><p>　　按處方比例稱取白毛夏枯草等飲片3份，按水提最佳工藝，所

24、得提取液按醇沉正交試驗所選擇的最佳工藝條件進行3次重復實驗。分別測得醇沉液中乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率（%）分別為：85.08、84.98、86.83，RSD=1.04%；干浸膏得率（%）分別為：15.97、17.94、16.03，RSD=1.26%，結(jié)果表明優(yōu)選出的工藝穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性好。</p><p><b>　　3討論</b></p><p>　　3.1最佳醇沉工藝所得

25、乙酰哈巴苷的轉(zhuǎn)移率為85.63%；醇沉前，干膏得率為45.58%，醇沉后，干膏得率為16.65%，降為原來的36.93%。表明該工藝保留了有效成分，降低了固形物得率，能減少服藥劑量。</p><p>　　3.2醇沉液的pH 和醇沉次數(shù)對醇沉效果可能有影響[5]，但通過預試驗表明醇沉液的pH 對水提液的醇沉效果影響均很小，所以選擇藥液的相對密度、醇沉濃度、醇沉時藥液的溫度為考察因素。</p><

26、p>　　3.3白毛夏枯草中乙酰哈巴苷最大吸收波長為197nm，為紫外末端吸收[2]。若采用等度法測定，干擾很大，峰形差，分離度也不好；本研究采用梯度法測定，峰形較好，分離度也能達到要求。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 張春容，肖丹.射干的提取純化工藝研究[J].華西藥學雜志,2006,21（5）：447-449.<

27、;/p><p>　　[2] 國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.</p><p>　　[3] 魏慶華,王勤. HPLC 測定增液承氣口服液中哈巴苷和哈巴俄苷含量[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(7):81-83.</p><p>　　[4] 王錦玉,仝燕,王智民. RP-HPLC法同時測定筋骨草藥材中哈巴苷和乙酰哈巴苷含